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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
1000
- 供应商：
兰博利德
- 保存条件：
4度保存
- 规格：
500T/2500T
| 规格： | 500T | 产品价格： | ￥360.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 2500T | 产品价格： | ￥1500.0 |
货号：B5001
存储条件：冰袋运输。试剂盒中A、B液室温或4℃保存；蛋白标准品（BSA）置于-20℃保存，有效期12个月。
产品规格：
BCA试剂A 100ml
BCA试剂B 3ml
蛋白标准品 2x1ml（5mg/ml）
PBS溶液 10ml
产品描述
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μL）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μL）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。
产品特点
1）灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达10μg/mL(在20~1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系）。
2）速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3）线性范围广，20-1000μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。
4) 不受大部分样品中的化学物质的影响, BCA法测定蛋白浓度的最大优点是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂, 可以兼容样品中高达5%的SDS; 5%的Triton X- 100; 5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM; β-巯基乙醇低于0.01%。
操作说明
BCA 工作液配制：
将试剂A和试剂B按照体积比50:1比例混合配成BCA工作液。取50mL试剂A与1mL试剂B混合，配成51mL BCA工作液。两者混合时会有沉淀形成，彻底混匀后沉淀消失。
微孔板测定程序：（工作范围 20-2000 μg/ml）
1. 蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品， 取 20µl 5mg/ml BSA 蛋白标准溶液用 PBS 溶液稀释至 100µl使其终浓度为 1.0 mg/ml。
2. 按照下表配制 BSA 标准测定溶液：
|
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 | |
|
1mg/ml BSA 标准溶液 μL |
5mg/ml BSA 标准溶液μL | ||||||||
|
BSA标准溶液 µl |
0 |
0.5 |
2.5 |
5.0 |
10 |
15 |
20 |
6 |
8 |
|
PBS溶液 μl |
20 |
19.5 |
17.5 |
15 |
10 |
5 |
0 |
14 |
12 |
|
BSA终浓度 μg/ml |
0 |
25 |
125 |
250 |
500 |
750 |
1000 |
1500 |
2000 |
|
总体积 µl |
20ul | ||||||||
3. 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用 PBS 补足到 20 µl
4. 向微孔板中加入200μL BCA工作液混匀, 37 ℃放置30分钟； 注：也可以室温放置2小时,或 60 ℃放置30分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低, 适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。
5. 测定 562 nm处的吸光值， 并记录读数； 以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对 照。
6. 以A562为纵坐标, BSA含量为横坐标, 绘制标准曲线, 计算样品中的蛋白浓度. 如果蛋白浓度不在标准曲线范围内, 请稀释样品后重新测定。
试管测定程序：（工作范围 20-1000 μg/ml）
1. 蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品, 取150µL 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入600μL PBS溶液稀释至750µl，使其终浓度为1.0 mg/ml。
2、按照下表配制 BSA 标准测定溶液：
|
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 | |
|
1mg/ml BSA 标准溶液 μL |
5mg/ml BSA 标准溶液μL | ||||||||
|
BSA标准溶液 µl |
0 |
2.5 |
12.5 |
25 |
50 |
75 |
100 |
30 |
40 |
|
PBS溶液 μl |
100 |
97.5 |
87.5 |
75 |
50 |
25 |
0 |
70 |
60 |
|
BSA终浓度 μg/ml |
0 |
25 |
125 |
250 |
500 |
750 |
1000 |
1500 |
2000 |
|
总体积 µl |
100ul | ||||||||
3. 将适当体积的待测样品加入到试管中，并用 PBS 补足到100 µl；
4. 向试管中加入 2ml BCA 工作液，混匀，37 ℃放置30分钟；
5 、6 步骤同上。
6. 注意事项
1）BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，显色反应的速度和温度有关，需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
2）长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃。
3）实验操作规范，提高上样量的精确度。
4）每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准蛋白定量宜每次都做标准曲线。
5）本公司所有产品仅限用于研发，必须专业人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！
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法是十分常用的蛋白质比色定量方法，很多试剂供应商都提供基于比色皿和微孔板的BCA蛋白定量试剂盒。BCA蛋白定量法相对于其它比色定量法具有操作简单、稳定、灵敏度高等优点。相对于蛋白质的固有的280nm吸收峰检测，BCA检测法提高了蛋白检测灵敏度和特异性，消除了核酸的干扰，核酸干扰在对细胞裂解物或其他生物样品进行蛋白定量时总是一个难以避免的干扰。在碱性条件下，蛋白将Cu2+ 还原为Cu+ ，Cu+ 与BCA 试剂形成紫色络合物，如图1，其吸光值与蛋白浓度成正比。测定在562nm 处的吸收值，并与标准
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功，或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存，需对细胞裂解液进行蛋白定量；为了判定蛋白的产量，需对纯化好的蛋白进行定量；为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记，同样需首先对蛋白样品进行定量，以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒，如BCA定量试剂盒等，操作起来，简便快捷。当然也有不少实验室，还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。实验对象为细胞样品，每份样品取1×106~1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳（SDS-PAGE）：将准备好的样品液和预染
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