病毒包装

病毒包装服务

基因调控工具选择指南

	质粒	慢病毒	腺相关病毒	腺病毒
是否整合	转染与整合效率很低	随机整合并稳定表达	不整合	不整合
表达丰度及速度	24hr开始表达	高水平表达，细胞水平72hr达到稳定，动物水平约需要96hr，开始表达	表达慢，细胞水平需要3-4天左右，动物水平需要2周左右开始表达	高水平表达，细胞水平36hr可达到高峰，动物水平约72hr达到高峰
维持表达时间	3-7天	稳定表达	稳定表达3-6个月	体内1-3周，体外一周
滴度	—	108TU/ml 109TU/ml	1012v.g/ml 1013v.g/ml	1011PFU/ml 1010PFU/ml
克隆容量	5-8kb的外源基因片段	不超过4kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低	不超过4kb的外源片段	高达7kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低
细胞实验	细胞系，部分细胞转染效率低	适合，广谱	AAV-DJ比较适合，其他血清型感染效率较差	适合，广谱，感染效率高，适合原代细胞感染
动物实验	不适合	感染效率低，根据观察时间和注射部位选择	非常适合，极低免疫原性	较适合，免疫原性较高，根据观察时间和注射部位选择
选择指南	做细胞实验外源基因片段较大，需要维持表达时间较短	做细胞实验需要稳定表达	做动物实验，需要维持表达时间较长的	外源基因片段较大，需要维持表达时间较长

 

慢病毒包装

产品简介

慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。
 

慢病毒特点

1.感染范围广。慢病毒可有效感染分裂和非分裂细胞，适合几乎所有细胞系，如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等
2.可稳定表达。慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，不随着细胞的分裂传代而丢失，可实现目的基因的长时间稳定表达
3.操作安全性高。慢病毒采用的是自失活复制缺陷型病毒株，保障操作安全
 

汉恒服务项目

 汉恒生物科技（上海）有限公司提供慢病毒载体构建、RNAi(shRNA)、miRNA　sponge／antago慢病毒、circRNA /LncRNA、CRISPR/Cas9慢病毒定制、慢病毒稳定株筛选、慢病毒现货、过表达和干扰慢病毒过表达和干扰慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。

 

慢病毒产品与服务

服务类型	提供产品	滴度	适用范围
常规基因过表达/干扰慢病毒 miRNA　sponge／antago慢病毒 circRNA /LncRNA过表达和干扰慢病毒 CRISPR/Cas9慢病毒定制 慢病毒构建稳转细胞系 慢病毒现货	常规滴度慢病毒	108TU/ml	适用于普通细胞系感染
	高滴度慢病毒	109TU/ml	适用于难转染细胞系，如悬浮细胞；或用于动物活体水平感染

载体选择：（常用）

编号	调控方式	元件顺序	原核抗性	真核抗性	荧光标记	启动子
LV005	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-mCherry-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	mCherry	CMV
LV006	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-mCherry-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	mCherry	CMV
LV007	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	CMV
LV008	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	CMV
LV011	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-ZsGreen-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	ZsGreen	CMV
LV012	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	ZsGreen	CMV
LV052	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	CMV
LV05	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	CMV
LV081	过表达	pHBLV-EF1-MCS-CMV-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	EF1
LV082	过表达	pHBLV-EF1-MCS-CMV-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	EF1
LV083	过表达	pHBLV-EF1-MCS-CMV-ZsGreen-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	ZsGreen	EF1
LV121	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-Luc-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	Luciferase	CMV
LV122	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-Luc-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	Luciferase	CMV
LV027	过表达teton	pHBLV-TetOn-SV40-Puromycin-TRE3GS-MCS	Ampicillin	Puromycin	无	TRE3GS
LV019	干扰	pHBLV-U6-MCS-PGK-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	U6
LV020	干扰	pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	U6
LV021	干扰	pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	ZsGreen	U6
LV051	干扰	pHBLV-U6-MCS-EF1-mCherry-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	mCherry	U6
LV124	干扰	pHBLV-U6-MCS-EF1-Luc-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	Luciferase	U6
LV144	干扰	PHBLV-U6-MCS-CMV-mCherry	Ampicillin	无	mCherry	U6
LV050	cas9/gRNA	pHBLV-U6-gRNA-EF1-CAS9-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	U6
LV055	cas9/gRNA	pHBLV-U6-gRNA-EF1-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	U6
LV133	cas9/gRNA	pHBLV-U6-gRNA-EF1-ZsGreen-Luc	Ampicillin	无	Luciferase	U6

慢病毒感染实例：

 

腺病毒包装

腺病毒特点：
感染范围广：腺病毒可适用于普通细胞系的感染，也可用于悬浮细胞、原代细胞等。
感染效率高：腺病毒的滴度可高达10¹¹PFU/ml，感染效率高，可感染悬浮细胞、原代细胞等。
载体容量大：腺病毒的载体容量较大，最高可达8kb。

腺病毒产品与服务：

服务类型	提供产品	滴度	适用范围
常规基因过表达/干扰腺病毒 miRNA sponge/antago腺病毒 circRNA/LncRNA过表达和干扰腺病毒 CRISPR/Cas9腺病毒定制 腺病毒纯化服务 腺病毒现货产品	普通腺病毒	1010PFU/ml或1011PFU/ml	适用于普通细胞系感染
	悬浮细胞专用腺病毒Ads	1010PFU/ml或1011PFU/ml	专为悬浮细胞特殊设计，兼容普通细胞和原代细胞，效率更高

 

载体选择（常用）
 

编号	调控方式	元件顺序	原核抗性	真核抗性	荧光标记	启动子
Adeasy014	过表达	pAdEasy-EF1-MCS-CMV-EGFP	Kanamycin	无	EGFP	EF1
Adeasy015	过表达	pAdEasy-EF1-MCS-CMV-mCherry	Kanamycin	无	mCherry	EF1
Adeasy018	过表达	pAdEasy-CMV	Kanamycin	无	无	CMV
Adeasy022	过表达	pAdEasy-CMV-3flag	Kanamycin	无	无	CMV
Adeasy023	过表达	pAdEasy-EF1-MCS-3flag-CMV-EGFP	Kanamycin	无	EGFP	EF1
Adeasy024	过表达	pAdEasy-EF1-MCS-CMV-LUC	Kanamycin	无	Luciferase	EF1
Adeasy027	过表达	pAdEasy-EF1-MCS-CMV-eRFP	Kanamycin	无	eRFP	EF1
Adeasy030	过表达	pAdEasy-EF1-MCS-3flag-CMV-mCherry	Kanamycin	无	mCherry	EF1
Adeasy032	过表达	pAdeasy-EF1-CircRNA-CMV-EGFP	Kanamycin	无	EGFP	EF1
Adeasy019	干扰	pAdEasy-U6	Kanamycin	无	无	U6
Adeasy020	干扰	pAdEasy-U6-CMV-EGFP	Kanamycin	无	EGFP	U6
Adeasy021	干扰	pAdEasy-U6-CMV-mCherry	Kanamycin	无	mCherry	U6
Adeasy028	干扰	pAdEasy-U6-CMV-eRFP	Kanamycin	无	eRFP	U6
Adeasy026	Cas9/gRNA	pAdEasy-U6-CMV-Cas9-2A-eRFP	Kanamycin	无	eRFP	U6
Adeasy043	Cas9/gRNA	pAdEasy-U6-scaffold-CMV-Cas9-T2A-ZsGreen	Kanamycin	无	ZsGreen	U6

 

腺病毒感染实例：

1.腺病毒感染贴壁细胞

mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒感染HCT116和HT29， 汉恒客户2017年发表于CELL，IF＞30

 

2.腺病毒感染原代细胞

 

3.腺病毒用于动物实验

腺病毒纯化的滴度可达到10¹¹PFU/ml，用于动物实验

小鼠眼部结膜下注射纯化腺病毒Ad-SIRT1和对照AdGFP：PFU=10¹¹/ml，3 μl/single eye；48hr后观察GFP表达

 

腺相关病毒（AAV）包装

AAV病毒特点：
1. 安全性高：AAV不参与任何疾病的发生，已经用于临床疾病的治疗。
2. 表达周期九：AAV免疫原性低，基因可持续表达半年以上。
3. 高效，用于动物活体水平感染：AAV滴度高达10¹³vg/ml以上，在体组织感染能力强。

汉恒生物提供腺相关病毒服务：

1、常规基因的过表达和干扰定制

2、组织特异性启动子系列AAV

3、CRISPR/Cas9 AAV

4、光遗传、化学遗传、钙指示剂、跨血脑屏障AAV、逆行示踪AAV

5、组织特异性DIO AAV、Cre重组酶

6、circRNA/LncRNA/miRNA过表达和干扰定制

 

汉恒生物AAV血清型推荐：

注射部位	推荐血清型	注射方式
心脏	AAV9	原位多点注射（局部）
		尾静脉注射（系统性）
肝脏	AAV8/AAV9	尾静脉注射
全脑（跨血脑屏障）	AAV-BBB	尾静脉注射
大脑（局部）	AAV9/AAV2/AAV5	立体定位注射
逆行示踪	AAV-Retro	局部注射
脊髓	AAV5/AAV1/AAV9	鞘内注射
脂肪	AAV9	腹内脂肪-腹腔注射
		皮下脂肪-原为注射
骨骼肌	AAV9	原位多点注射
眼睛	AAV2	玻璃体腔注射
	AAV-DJ	视网膜下腔注射
肺脏	AAV6	无创气管注射/滴鼻
肾脏	AAV2/AAV9	肾脏肾盂原位注射/尾静脉注射
肠道	AAV1/AAV5	灌肠/腹腔注射
血管（内皮为主）	AAV1/AAV5	腹主动脉局部感染
胰腺	AAV8	腹腔注射/尾静脉注射

特异性启动子：

组织	启动子名称	启动子特性
神经	hSyn	神经元特异性启动子
	mecp2	较短的神经元特异性启动子
	c-fos	兴奋神经元启动子
	CaMKllα	前脑谷氨酸能神经元特异性启动子
	TUBA1A (Tα1)	早期神经元特异性启动子
	hVGAT	GABA能神经元/中间神经元特异性启动子
	TH	多巴胺神经元特异性表达启动子
	gfaABC1D (minimal GFAP)	星形胶质细胞特异性启动子
	CD68	活化状态的小胶质细胞特异性启动子
	ibal	活化和静息状态的小胶质细胞特异性启动子
	CNP	少突胶质细胞或施万细胞特异性启动子
	MBP	少突胶质细胞特异性启动子
	Pdgfra	少突胶质前体细胞特异性启动子
	Pirt	感觉神经元特异性启动子
心脏	cTNT	心肌细胞特异性启动子
	POSTN	心肌成纤维细胞特异性启动子
肌肉	MHCK7	肌肉特异性启动子
	SM22a	平滑肌特异性启动子
	ACTA1 (synthesized Spc5-12)	肌细胞特异性启动子
肺	SP-C (SFTPC)	肺上皮细胞特异性启动子
肝脏	TBG	肝脏特异性启动子
肾脏	nphs1	肾脏足细胞特异性启动子
	nphs2	肾脏足细胞特异性启动子
	Ksp-cadherin	肾小管上皮细胞特异性启动子
胰腺	padx1（pdx1）	胰腺特异性启动子
	Insulin2	胰腺特异性启动子
脂肪	FABP4 (aP2)	脂肪细胞特异性启动子
内皮	TIE	内皮细胞特异性启动子
视网膜	rpe65	视网膜特异性启动子
前列腺	DD3	前列腺癌细胞特异性启动子
皮肤	Keratin14（K14）	皮肤表皮细胞特异性启动子
巨噬细胞	F4/80	巨噬细胞特异性启动子

汉恒生物特异性AAV血清型：

血清型名称	对应特异性细胞
AAV-shH10	视网膜穆勒细胞
AAV-Vec	内皮细胞
AAV-MG	小胶质细胞
AAV-br1	脑血管内皮细胞
AAV-anc80L	视网膜/内耳
AAV-GL	视网膜
AAV-NN	视网膜
AAV-capB10	脑部

 

腺相关病毒感染实例（AAV）