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- 腺病毒包装/AdV/重组腺病毒包装
- 武汉
- 2026年04月16日
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BrainVTA
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腺病毒包装/AdV/重组腺病毒包装
腺病毒（Adenovirus,AdV）是直径约为70-100 nm、空间结构为立体对称的20面体、衣壳由252个壳粒组成的无包膜线性双链DNA病毒。目前已知的人腺病毒血清型有51种，根据组织嗜性不同被分成ABCDEF六个不同亚群，其中C亚群的第2和第5血清型为最常见的腺病毒载体。基于人腺病毒5型（Ad5）改造的载体使用较为广泛，其特点是人为地删除了E1和E3基因，导致腺病毒失去复制能力和一定程度上降低免疫原性，使得Ad5成为一种广泛、安全、有效的基因运输载体。腺病毒除了用作基因治疗药物载体和疫苗载体以外，在基础生物医学研究上也受到科研工作者的青睐，可以搭载最高达8 kb大小的目的基因。
腺病毒特性：
● 腺病毒基因组不会整合到宿主细胞中，可以直接进行翻译和转录，相比RNA病毒起效更快。
● 腺病毒感染能力强，转导效率高，是体外难感染细胞最佳选择；对于细胞实验在感染后36-48小时会出现表达高峰；对于动物实验则在5天左右即达到表达高峰，表达效果可维持1-3周左右。
● 腺病毒具有嗜肝性，尾静脉注射主要感染肝脏。
重组腺病毒包装系统
重组腺病毒包装系统是将外源基因克隆到穿梭载体上，再重组到腺病毒的大骨架载体（携带腺病毒主要功能基因）上。目前常用AdEasy系统和Ad max系统包装重组腺病毒。
AdEasy系统：利用同源重组在大肠杆菌中完成外源基因插入腺病毒基因组的过程。其优势在于可避免双载体在细胞中转染，大幅度降低非重组穿梭质粒造成的背景，提高腺病毒的出毒效率，缩短出毒时间。
Ad max系统：将含有外源基因的腺病毒穿梭质粒和腺病毒包装质粒共转HEK293细胞，在Cre/Loxp或者Flp/Frt系统的作用下实现重组，产生重组腺病毒。该系统操作简便，获得较高的病毒滴度。
常用重组腺病毒包装系统比较：
我司使用Ad Max系统包装重组腺病毒。
重组腺病毒包装流程
重组腺病毒客户文章案例展示
案例1：
为探究血管活性肠肽（VIP）在调节细胞骨架中的作用，既往研究表明，AnxA1-/-小鼠表现出脑微血管内皮细胞中肌动蛋白细胞骨架扭曲，于是作者利用表达shANXA1的重组腺病毒载体感染人脐静脉内皮细胞（HUVECs），通过鬼笔环肽染色F-肌动蛋白，结果显示AnxA1敲低的HUVECs中观察到F-肌动蛋白纤维更细，VIP处理诱导了清晰的跨细胞F-肌动蛋白纤维的出现，表明肌动蛋白组织更正常。（客户文章，Lou X, Mou Q, Zhao B, et al. Oxid Med Cell Longev. 2021.）
图1. AnxA1敲低的HUVECs中鬼笔环肽染色的F-肌动蛋白
案例2：
作者利用表达全长人ABCA1基因的重组腺病毒载体（Ad-ABCA1），研究ABCA1过表达对ANXA1亚细胞定位的影响及通过何种机制产生这种影响。Ad-ABCA1处理维持IR（缺血再灌注）后ANXA1的膜定位为探讨ABCA1过表达对ANXA1亚细胞定位的影响，视网膜切片上免疫染色检测ANXA1的表达。研究人员利用DAPI可视化细胞核，如图2所示，IR诱导ANXA1的核定位。而Ad-ABCA1处理，减少了ANXA1核内表达。此外，作者在HEK293细胞的膜提取物中测定ANXA1的表达，发现脂多糖（LPS）处理降低ANXA1表达，而Ad-ABCA1维持ANXA1的表达。
图2. Ad-ABCA1在体内外实验中对ANXA1核定位的影响
ABCA1通过与importin β（核转运受体）竞争减少ANXA1核定位
前人研究发现ANXA1核定位与importin β有关。然而，与ABCA1过表达相关的ANXA1核定位的减少是否是由于ABCA1与importin β竞争结合ANXA1尚不清楚。在HEK239细胞中LPS诱导ANXA1的核定位，但被Ad-ABCA1部分阻断。进一步发现，Ad-ABCA1降低ANXA1与importin β的结合；ABCA1表达的减少（siRNA）增加ANXA1与importin β的结合。此外，利用importin β1特异性抑制剂importazole（IPZ）阻断importin β功能。结果发现ABCA1siRNA增加ANXA1核定位，而IPZ部分阻断这种效果。（客户文章，Luo J, Wang S, Zhou Z, et al. Mol Ther Methods Clin Dev. 2021.）
图3. ABCA1过表达影响ANXA1核定位的作用机制
我司重组腺病毒测试效果
重组腺病毒体外感染细胞实例
重组腺病毒靶向小鼠肝脏实例
rAd5-U6-shRNA(NULL)-mCMV-ZsGreen
表达部位：小鼠肝脏
注射方式：尾静脉
注射剂量：1.0E+10 PFU/只
取样时间：注射后72 h取样
产品信息
我司可提供AdV病毒定制包装服务，欢迎前来咨询。
运输与存储
我司纯化重组腺病毒存储于腺病毒保存液中（如有需求，可换为PBS缓冲液），并采用干冰运输。收到重组腺病毒后，立即放置于-80℃，可保存约一年。若放置于-20℃则可保存2-3周。融解后的重组腺病毒可在4℃保存1-2周。请避免反复冻融。
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文献和实验、TCID50、PFU Page 16： 1. pShuttle-CMV图谱 2. 病毒滴度测定 3. 重组腺病毒质粒转染 4. 重组腺病毒传代 Page 17： 1. 噬斑纯化 2. Adeno-X系统腺病毒包装protocol 3. PCR鉴定重组载体的缺陷 4. Sequences of pAdTrack-CMV and pAdEasy-1 5. BJ5183中质粒提取 Page 18： 1. 重组后质粒鉴定 2. BJ5183细菌的验证 3. 腺
场景： 【体外】构建稳定过表达/敲降/敲除的细胞系。 【体外】对原代细胞、干细胞进行长期的基因功能研究。 【体内】在某些需要长期表达且对免疫反应要求不极端的动物模型中 (如部分脑区注射)，但需注意其扩散能力有限。 图 1.慢病毒包装、转导与基因整合[1]。 腺病毒——“高效瞬转的急性子” 腺病毒是无包膜的双链 DNA 病毒。它通过其纤维蛋白与细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体 (CAR) 等结合进入细胞，但其 DNA 不整合到宿主基因组中
A细胞（可表达E1基因），使腺病毒能顺利完成复制扩增（图3）。大家可以根据自己的实验需求针对性选择，两种系统的具体特点比较见表1。 表1 腺病毒两种包装系统的对比 图1 AdMax系统包装原理示意图 图2 AdEasy系统包装原理示意图 图3 腺病毒包装过程示意图 那么有哪些腺病毒产品可供选择呢？ 在此之前，我们先看看它是如何感染细胞的。首先，腺病毒衣壳主要由三种蛋白组成：六邻体蛋白、五邻体蛋白、纤突蛋白。每个五邻体蛋白上结合着一根纤突蛋白。在腺病毒感染细胞的过程中
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