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- 稳定细胞株筛选
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- 2026年08月07日
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- 服务名称：
稳定细胞株筛选
- 提供商：
汉恒生物
稳定细胞株构建Stable Cell Line
研究某个基因的功能最常用的手段是在宿主细胞中过表达或者通过RNA干扰的方法knock-down该基因，常规手段有瞬时转染和筛选稳定细胞系。
优势：筛选出该基因的过表达或者RNA干扰的稳定细胞系会给您的实验带来极大的便利。有了稳定细胞系，后期的Co-IP或者Pull-Down实验会非常便利；稳定表达重组荧光蛋白的细胞系可以让您动态地观察分子在细胞中的运动。
原理：构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
我们的优势
种子优良
低代数细胞来源，无支原体无黑胶虫
性状稳定
严酷的筛选及靶基因表达验证体系
活力无损
严格的建系后连续3代细胞增殖活力评价
构建稳定株背景介绍
稳转和瞬转的区别
稳定转染：即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。
瞬时转染：即外源基因不整合到宿主染色体中，表达时间短暂，绝大部分以游离形式存在，不能随细胞分裂而一同复制，导致最后拷贝数被稀释，无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染，多为瞬时转染。
一般如下情况需要构建稳定株
1、长期在目的细胞中研究基因功能，通过构建稳定株，可以降低频繁转染成本，方便实验研究；
2、部分蛋白半衰期极长，瞬时RNA只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳定株可以实现更好的基因干扰效果；
3、瞬转往往会引入极高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精确，构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究；
4、需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的；
5、需要用细胞做动物实验的，比如裸鼠成瘤等.
筛选稳定细胞系的方法
1、质粒构建稳转细胞系
转染质粒后，单克隆方法筛选稳定细胞系。但质粒的整合效率低，一般不推荐
2、慢病毒构建稳转细胞系
慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定细胞系筛选方法。
慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，因此，慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株circRNA /LncRNA过表达和干扰慢病毒。
汉恒生物构建包装的带puromycin抗性的慢病毒，在感染目的细胞后，可通过加入puromycin进行选择性筛选，从而获得稳定表达shRNA或者特定基因的细胞株。我们提供慢病毒包装服务（您可以自己完成稳态细胞筛选），或者一站式的稳定细胞系的筛选服务
质量标准
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检测项目 |
检测方法 |
检测结果 |
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支原体 |
PCR |
阴性 |
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内毒素 |
LAL |
合格 |
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细菌 |
培养法 |
阴性 |
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真菌 |
培养法 |
阴性 |
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文献和实验[1]Dang H, Liu Y, Zhou Y, et al. TET1 loss propels the development of hyperthyroidism by remodeling histone modifications of PAX8 promoter. Exp Mol Med. 2025;57(10):2376-2392.
（杂志:Experimental & Molecular Medicine，IF=12.9，西南交通大学第一附属医院）
[2]Zhang Y, Huang R, Cheng M, et al. Gut microbiota from NLRP3-deficient mice ameliorates depressive-like behaviors by regulating astrocyte dysfunction via circHIPK2. Microbiome. 2019;7(1):116. Published 2019 Aug 22.
（杂志:Microbiome，IF=10.465，东南大学医学院药学系）
[3]Ruan X, Huang Y, Zeng Y, et al. The SOX12-YBX1-LDHA signaling axis drives metastasis in papillary thyroid carcinoma. Cell Death Dis. 2025;16(1):474. Published 2025 Jul 1.
（杂志:Cell Death & Disease，IF=9.6，天津医科大学）
[4]Cai R, Li C, Shi W, et al. SOX3 facilitates granulosa cell proliferation and suppresses cell apoptosis through modulating PI3K/AKT pathway by targeting SPP1. Cell Mol Life Sci. 2025;82(1):266. Published 2025 Jun 30.
（杂志:Cellular and Molecular Life Sciences，IF=6.2,安徽医科大学）
[5]Zhang D, Tao L, Xu N, et al. CircRNA circTIAM1 promotes papillary thyroid cancer progression through the miR-646/HNRNPA1 signaling pathway. Cell Death Discov. 2022;8(1):21. Published 2022 Jan 12.
（杂志:Cell Death Discovery，IF=5.241，浙江大学邵逸夫医院）
想长期表达某个基因，但它一高表达细胞就死、一过表达表型全是"中毒"——这时候很多老师会想到诱导表达系统： Tet 诱导稳定细胞株（Tet-On）怎么构建？和普通稳转株差在哪？诱导倍数怎么验证？ 先说结论： Tet 诱导稳转株的核心是把"表达开关"装进稳转系统：细胞先稳定表达调控蛋白（Tet-On 的 rtTA），再引入由 TRE 应答元件控制的目的基因。平时不表达或低表达，加入诱导剂（多西环素 doxycycline）后才按剂量诱导表达。构建框架仍是"感染 → 筛选 → 验证 → 冻存
想给内源基因加上荧光标签、引入点突变，或者在特定位点插入报告基因，就需要 CRISPR 敲入（Knock-In, KI）： CRISPR KI 稳定细胞株怎么构建？为什么 KI 比 KO 难、周期更长？怎么验证敲入成功？ 先说结论： KI 的核心是"Cas9 切割 + 同源重组修复（HDR）"：用 sgRNA 引导 Cas9 在特定位点切割，同时提供带同源臂的修复模板（供体），把目的序列精确整合到基因组特定位点，再经单克隆分选和 PCR+测序验证，得到基因型明确的 KI 稳转株。与 KO
做基因功能缺失研究，敲低（KD）只能把 mRNA 打下来一部分，很多老师会直接上 CRISPR： CRISPR 敲除（KO）稳定细胞株到底怎么构建？sgRNA 怎么筛？单克隆怎么挑？"敲除成功"的验证标准是什么？ 先说结论： 标准路线是"Cas9 + sgRNA 使靶基因移码 → 单克隆分选 → PCR 测序验证基因型 → 蛋白水平确认敲除"，最终交付 100% 纯合子 KO 稳转株。KO 和 KD 的最大区别是：KO 做的是基因编辑，必须做基因型验证，且通常以单克隆形式交付。 方案确认
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