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北京百泰派克生物科技有限公司
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单细胞组学是什么
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单细胞组学解析:生命科学研究的革命性视角
在生命科学研究领域,单细胞组学已成为解析生物复杂性的关键工具。传统组学技术(如转录组、基因组或dànbáizhì组学)通常基于群体细胞分析,掩盖了细胞间的异质性。而单细胞组学通过高通量技术对单个细胞进行分子层面的解析,揭示细胞类型、状态及功能的细微差异,为发育生物学、肿瘤微环境、免疫学及神经科学等领域提供了qiánsuǒwèiyǒu的分辨率。单细胞组学的核心在于其能够捕捉细胞间的动态变化,例如在胚胎发育过程中不同谱系的分化轨迹,或在肿瘤微环境中免疫细胞与癌细胞的相互作用。
单细胞组学的研究流程主要包括单细胞分离、文库构建、高通量测序及生物信息学分析。单细胞分离技术如微流控(10x Genomics)、激光捕获显微切割(LCM)或液滴微流控(Drop-seq)等,能够高效捕获单个细胞并保持其完整性。随后,通过逆转录和扩增构建单细胞文库,再结合下一代测序技术(NGS)获取转录组、表观组或dànbáizhì组数据。生物信息学分析则通过降维聚类(如t-SNE、UMAP)、轨迹推断(如Monocle、PAGA)及功能富集分析,解析细胞亚群及其功能状态。单细胞组学的应用不jǐnxiàn于基础研究,在临床诊断(如循环肿瘤细胞分析)和药物开发(如靶向特定细胞亚群的疗法)中也展现出巨大潜力。
单细胞组学的技术发展迅速,但实验设计需考虑样本类型、细胞数量及数据质量。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。例如,单细胞RNA测序(scRNA-seq)的成本受测序深度和细胞通量影响,而单细胞ATAC-seq(scATAC-seq)则需考虑染色质可及性分析的复杂度。此外,多组学整合(如CITE-seq联合dànbáizhì组和转录组)进一步提高了数据维度,但也对实验和计算资源提出了更高要求。
常见问题:
Q1. 单细胞组学能否应用于低质量或降解样本(如福尔马林固定石蜡包埋组织)?
A:目前已有部分技术(如DR-seq、Arc-well)可处理FFPE样本,但数据质量可能受核酸片段化影响。优化实验方案(如延长酶切时间)和生信分析(如片段校正算法)可部分改善结果。
Q2. 如何区分单细胞数据中的技术噪音与真实生物学变异?
A:需通过空载对照(empty droplets)和质控指标(如线粒体基因比例、UMI数量)过滤低质量细胞。此外,批次效应校正工具(如Harmony、BBKNN)和差异表达分析(如MAST、DESeq2)可进一步区分技术因素与生物学信号。
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文献和实验血液 CD66b+ 中性粒细胞(PMN)和胰腺癌组织 CD45+ 免疫细胞 单细胞捕获平台:BD RhapsodyTM 单细胞实验分组: HC-PMN(健康组)×2;CP-PMN(慢性胰腺炎组)×2;PDAC-PMN 细胞×5;PDAC免疫细胞×5 主要技术手段: 单细胞测序,空间转录组测序,转录组测序,蛋白组、代谢组质谱分析,免疫荧光,免疫组化,pcr(qpcr)分析 单细胞分析工具应用: 细胞聚类分析,subCluster 分析,差异基因表达分析,GO/Pathway 分析,拟时序分析
单细胞测序在疾病诊断和细胞异质性研究中发挥着重要作用。然而目前的单细胞测序手段需要将细胞消化并裂解才能够进行,而细胞状态在这一操作中不可避免的会发生改变,因此很难掌握细胞真实的基因表达情况,尤其对于基因通路上表达变化的检测为不利。近期苏伊士理工大学使用FluidFM创建了一种原位活细胞基因测序方法,这种方法能够在不杀死细胞的情况下完成对细胞的测序工作。通过这种技术该团队成功完成单细胞RNA基因测序,并通过这种方法检测到了细胞的基因表达和细胞周期状态变化。下面本文就这项工作的具体内容进行阐述
单细胞和空间组学课题研究思路及案例分析
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