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100ul*10
GS115酵母感受态细胞
| 产品编号 |
产品名称 |
规格 |
| MCC0208 |
GS115酵母感受态细胞 |
100μl*10 |
| 酵母促转化剂 |
100 μl /-20℃ |
|
| 毕赤酵母转化液 |
5 ml /4℃ |
保存条件:-80℃。
1.使用说明:
1).取需转化质粒5µg,酶切,回收
2).取一支无菌的1.5ml EP管,依次加入预冷的线性质粒1-5 µg (体积不高于15 µl),酵母促转化剂 10µl,100µl冰上融化的 GS115感受态细胞,毕赤酵母转化液 500µl,轻轻翻转混匀6-8次
3).30℃ 水浴30min,每10min轻轻翻转混匀6-8次;
4).每支加入20ul的二甲基亚砜
5).42℃水浴15min,每5min轻轻翻转混匀6- 8次;
6).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h
7).12000rpm瞬时离心弃上清,用100ul 0.9% NaCl 重悬,涂板,30℃培养48 - 96h。
3.注意事项:
1).使用酵母促转化剂前,请把装有酵母促转化剂的管子在沸水 中煮沸5min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用
2).转化液低温环境下会析出,请于常温下完全溶解后使用
3).转化全过程要无菌操作
*本试剂仅供实验室研究使用
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文献和实验相关专题 酵母感受态细胞制备可以:(1)用于建立酵母转化体系;(2)用于酵母表达系统 构建;(3)用于酵母其他分子生物学研究。 一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌用-酵母提取物(Fisher)、 细菌用-蛋白胨(Fisher)、葡萄糖(Fisher)、细菌用-琼脂粉、去离子水、甘油(Sigma)、二甲基亚砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Sigma)、醋酸锂(Sigma)、鲑鱼精子细胞DNA
1.5ml缓冲液B,彻底混匀; 30℃水浴孵育1h; 室温下2000g离心10min,去除上清液,菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中; 离心样品,去除上清液,轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中; 将所有转化液铺于选择性平板,于30℃孵育3~4天后,鉴定; 3、毕氏酵母电转化法 (1)E.coli TOP10F’感受态细胞的制备 取10ul TOP10F’菌液,接种于200ml LB液体培养基中活化培养,37℃,200 rpm,16~18小时。取100ul菌液接种于200ml液体LB
酿酒酵母感受态细胞的制备 (1)从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基,30℃,250 rpm 培养过夜。 (2)测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。 (3)将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。 (4)在28~30℃摇床中继续培养3~6 hr,使其OD600值达到0.6~1.0。 (5)于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞,弃上清。 (6)用10 ml 洗液洗酵母
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