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- 2026年01月05日
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100ul*10
EBY100酵母感受态细胞
| 产品编号 |
产品名称 |
规格 |
| MCC0203 |
EBY100酵母感受态细胞 |
100μl*10 |
| Carrier DNA |
5ug/μl；100 μl /-20℃ |
|
| PEG/LiAc |
5 ml /4℃ |
保存条件：-80℃。
1.产品简介：
EBY100菌株是酿酒酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌的污染和生长。EBY100感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存3个月，pYD1质粒检测转化效率>104cfu/ug DNA
基因型：MATα ura3-52 trp1 leu2∆1 his3∆200 pep4::HIS3 prb1∆1.6R can1 GAL (pIU211)
2.使用说明：
1).取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3μg, .Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重复一次)，100μl冰.上融化的EBY100感受态细胞，PEG/LiAc 500ul， 轻轻翻转混匀6-8次;
2).30℃ 水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次;
3).每支加入20ul的二甲基亚砜; (用于提高转化效率，可不做)
4).42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6- 8次;
5).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h; (用于提高转化效率， 可不做)
6).12000rpm瞬时离心弃上清，用100ul 0.9% NaCl 重悬，涂板,30℃培养48 - 96h。
3.注意事项：
1).感受态细胞最好在冰上融化.
2).PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。
*本试剂仅供实验室研究使用
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文献和实验相关专题 酵母感受态细胞制备可以：(1)用于建立酵母转化体系;(2)用于酵母表达系统 构建;(3)用于酵母其他分子生物学研究。 一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌用-酵母提取物(Fisher)、 细菌用-蛋白胨(Fisher)、葡萄糖(Fisher)、细菌用-琼脂粉、去离子水、甘油(Sigma)、二甲基亚砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Sigma)、醋酸锂(Sigma)、鲑鱼精子细胞DNA
1.5ml缓冲液B，彻底混匀； 30℃水浴孵育1h； 室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中； 离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中； 将所有转化液铺于选择性平板，于30℃孵育3～4天后，鉴定； 3、毕氏酵母电转化法 （1）E.coli TOP10F’感受态细胞的制备 取10ul TOP10F’菌液，接种于200ml LB液体培养基中活化培养，37℃，200 rpm，16～18小时。取100ul菌液接种于200ml液体LB
酿酒酵母感受态细胞的制备 （1）从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基，30℃，250 rpm 培养过夜。 （2）测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。 （3）将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。 （4）在28~30℃摇床中继续培养3~6 hr，使其OD600值达到0.6~1.0。 （5）于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞，弃上清。 （6）用10 ml 洗液洗酵母
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