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- 中国
- BNCC137649
- 2026年03月19日
企业认证
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Enterococcus faecium
- 库存：
88
- 细胞形态：
冻干粉；斜面；菌液；平板
- 运输方式：
低温运输
- 规格：
支
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文献和实验【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤！！！（从验证到阳性克隆的筛选）
小弟把最近一个多月来所做的工作，做了个总结，供大家一起分享，希望版主能加分，现在我还是0分，很多帖子不能阅览，希望版主加分，今后我实验有了新的进展，我会把总结发上来，和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF，目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结，再与大家分享。希望大家支持，绝对原创！！！ 一.实验材料 1．菌珠 E.coli DH5α GS115酵母菌 2．质粒 PIC9K/VEGF165重组质粒 3．试剂 NB酵母氮源 G418 gl2、Not1
时配制： SED：19mlSE 加1ml 1M DTT PEG/CaT：1:1混合40%PEG及CaT 实验材料 GS115中，用SalI，StuI或SacI线性化的DNA可分离His Mut 重组子 KM71中，用SalI，StuI或SacI线性化的DNA可分离His Muts重组子 亲代载体用相同酶线性化 对照包括无DNA，线性化PBR322DNA及质粒(无细胞)涂板来检测是否有污染
实验步骤 1. Mut 胞内或分泌表达：为检测表达条件是否有效，可培养GS115β-gal (Mut )(胞内表达-半乳糖苷酶)。亲代载体转化GS115 或KM71 作为胞内表达背景对照。 1) 挑取单克隆，接种至25mlMGY，BMG或BMGY中，(250ml摇瓶)，28-30度，250-300rpm摇至OD600=2-6(对数生长，大约16-18小时)。 2) 室温1500-3000g离心
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