- ￥1985 - 19205
- 翌圣生物（Yeasen）
- 12309ES
- 上海
- 2026年02月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Hieff NGS®Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
Box I：2-8°C保存、Box II：-25~-15℃保存
- 规格：
8T(12309ES08)/24T(12309ES24)/96T(12309ES96)
| 规格： | 8T(12309ES08) | 产品价格： | ￥1985.00 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 24T(12309ES24) | 产品价格： | ￥5335.00 |
| 规格： | 96T(12309ES96) | 产品价格： | ￥19205.00 |
Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit是兼容Illumina和MGI双平台的mRNA转录组文库构建试剂盒，本试剂盒将cDNA二链合成与Endprep、dA-tailing进行合并，极大地缩减建库时间。二链合成模块配有两种Buffer，客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。本产品适用于起始模板为10 ng-4 μg不同来源真核生物总RNA样本。经过mRNA分离、片段化、双链cDNA合成、末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增，总RNA样品最终转化为兼容Illumina®和MGI®平台测序的文库。
试剂盒包含两个独立模块，BOX-I为纯化mRNA所需的oligo (dT)磁珠。BOX-II包含mRNA片段化试剂，反转录试剂，常规和链特异性ds-cDNA合成，以及后续建库所需的所有试剂。其中链特异性二链合成Buffer中将dTTP替换为dUTP，使cDNA第二链中掺入dUTP，而本试剂盒使用的高保真DNA聚合酶无法扩增含尿嘧啶的DNA模板，实现链特异性。提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品信息
| 货号 | 12309ES08 / 12309ES24 / 12309ES96 |
| 规格 | 8 T / 24 T / 96 T |
组分信息
| 组分编号 | 组分名称 | 12309ES08 | 12309ES24 | 12309ES96 | ||
| BOX-I | 12603-A |  |
mRNA Capture Beads | 0.4 mL | 1.2 mL | 4.8 mL |
| 12603-B |  |
Beads Binding Buffer | 0.4 mL | 1.2 mL | 4.8 mL | |
| 12603-C |  |
Beads Wash Buffer | 5 mL | 15 mL | 60 mL | |
| 12603-D |  |
Tris Buffer | 0.4 mL | 1.2 mL | 4.8 mL | |
| BOX-II | 12309-A |  |
Frag/Prime Buffer | 150 μL | 450 μL | 2×900 μL |
| 12309-B |  |
1st Strand Enzyme Mix | 16 μL | 48 μL | 192 μL | |
| 12309-C |  |
Strand Specificity Reagent | 50 μL | 150 μL | 580 μL | |
| 12309-D |  |
2nd Strand Buffer (dNTP) | 240 μL | 720 μL | 2×1440 μL | |
| 12309-E |  |
2nd Strand Buffer (dUTP) | 240 μL | 720 μL | 2×1440 μL | |
| 12309-F |  |
2nd Strand Enzyme Master Mix | 40 μL | 120 μL | 480 μL | |
| 12309-G |  |
Ligation Enhancer | 240 μL | 720 μL | 2×1440 μL | |
| 12309-H |  |
Novel T4 DNA Ligase | 40 μL | 120 μL | 480 μL | |
| 12309-I |  |
2×Super Canace® II High-Fidelity Mix | 200 μL | 600 μL | 2×1200 μL | |
| 12309-* | * | Primer mix | NA | NA | NA | |
| 注：primer mix为建库必须试剂，但该成分不包含在本试剂盒，需要额外配置。本试剂盒组分兼容Illumina和MGI双平台，但需要额外配置专属于Illumina®或者MGI®的primer mix(Cat# 13335 Primer Mix for Illumina®以及Cat# 13334 Primer Mix for MGI®)。 | ||||||
储存条件
Box I：2-8°C保存、Box II：-25~-15℃保存。有效期1年。
使用说明
实验前请仔细阅读：
一、关于接头连接(Adapter Ligation)
1.本公司可提供Illumina®或者MGI®长接头(Barcoded Adapter)试剂盒和短接头试剂盒，客户可根据实验需求进行选择。
2.我们建议选用高质量的商业化接头，如客户使用自制接头，请委托具有NGS引物合成经验的公司，并备注需进行严格的防污染控制。此外，进行接头退火操作时，请在超净台完成。每次只操作一种接头，防止交叉污染。
3.使用接头时，请提前将接头取出放在4°C或冰盒上解冻；室温操作时，实验室温度最好不要超过25°C，防止接头解链。
4.建库过程中，接头浓度过高或过低都会导致建库成功率变低。本试剂盒操作方案中，所加入的接头体积固定为5 μL，请根据初始的RNA投入量，参考表1对接头进行稀释。接头稀释液请选择0.1×TE buffer，稀释过的接头可在4°C保存48 h。
表1-1 Input Total RNA量与Illumina接头浓度推荐表
| Input Total RNA | Illumina Adapter stock concentration |
| 10 ng | 1 μM |
| 100 ng | 1.5 μM |
| 500 ng | 3 μM |
| ≥1 μg | 5 μM |
表1-2 Input Total RNA量与MGI接头使用浓度推荐表
| Input Total RNA | MGI Adapter stock concentration |
| 100–499 ng | 2 μM |
| 500–4000 ng | 5 μM |
*可根据不同类型Total RNA样本及投入量，按需求适当调整Adapter使用量
二、关于磁珠纯化与分选 (Bead-based Clean Up and Size Selection)
1. 建库过程中有多个步骤需要使用DNA纯化磁珠，我们推荐使用Hieff NGS® DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601)或AMPure® XP磁珠(Beckman Cat#A63880)进行DNA纯化和分选。
2. 磁珠使用前应先平衡至室温，否则会导致得率下降、分选效果不佳。
3. 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。
4. 转移上清时，请勿吸取磁珠，即使微量残留都将影响后续文库质量。
5. 磁珠洗涤使用的80%乙醇应现用现配，否则将影响回收效率。
6. 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应；过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下，室温干燥3-5 min足以让磁珠充分干燥。
7. DNA纯化或长度分选产物如需保存，可使用0.1×TE Buffer洗脱，产物于4°C可保存2天，-20°C可保存1个月。
三、关于文库扩增 (Library Amplification)
1. 本试剂盒中的文库扩增组分由本公司第二代高保真DNA聚合酶所组成，在第一代的基础上，大大增强了扩增的均一性，即使是低拷贝的基因，也能进行无偏好性地扩增。
2. 文库扩增步骤需要严格控制扩增循环数。循环数不足，将导致文库产量低；循环数过多，又将导致文库偏好性增加、重复度增加、嵌合产物增加、扩增突变积累等多种不良后果。表2列举了使用本试剂盒进行文库扩增，Input Total RNA量与相应扩增循环数的推荐。
表2 Input Total RNA 量与扩增循环数推荐表*
| Input Total RNA | Number of cycles | |
| Non-stranded | Stranded | |
| 10 ng | 15 | 15 |
| 100 ng | 14 | 14 |
| 500 ng | 12 | 13 |
| 1 μg | 11 | 12 |
【注】：*由于文库产量不仅与投入量和扩增循环数相关，样本质量、片段化条件、分选条件等都会影响产量。建库过程中请根据实际情况综合考虑，选择最合适的建库条件。
四、自备材料 (Other Materials)
1. DNA纯化磁珠：Hieff NGS® DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601)或AMPure® XP Beads (A63880)或其他等效产品。
2. RNA质控：Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico Chip或其他等效产品。
3. Adapters：Complete Adapter for Illumina®使用（Cat#13519-13520或其他等效产品）或Complete Adapter for MGI®使用（Cat#13360-13362或其他等效产品）。
4. 文库质检：Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/ High Sensitivity Chip或其他等效产品；文库定量试剂。
5. 其他材料：无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。
五、操作流程 
图1 mRNA建库试剂盒流程原理流程图
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文献和实验时样本之间干扰。 Q：说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ，细胞量多的话对检测结果有没有影响？ A：建议细胞量最多不要超过 106个，过量的细胞相当于染料被稀释，影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了，通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q：是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer？ A：不行，Binding Buffer 是必须要加的，Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+，Binding
1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活，必须了解酶催化反应总的反应式，而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量，使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
针对同一指标，生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗？
一、两种方法检测原理 两种方法的基本原理都是朗伯-比尔定律，但是具体形成过程和检测的方法不一样的。 1) 生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应，其反应过程可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图，如下所示： 延迟区：无规律可寻。 等速区：对应的是速率法，一般应用于酶活力的检测。 过渡区：对应的是固定时间法，目的是解决某些化学反应的非特异性问题，提高准确度。 平衡区：对应的是终点法，主要是测定某物质在样本中的含量。 目前
