- ￥1985 - 217082
- 翌圣生物（Yeasen）
- 12308ES
- 上海
- 2025年10月16日
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- 英文名：
Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
8 T(12308ES08)/24 T(12308ES24)/96 T(12308ES96)/1000 T(12308ES98)
| 规格： | 8 T(12308ES08) | 产品价格： | ￥1985.00 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 24 T(12308ES24) | 产品价格： | ￥5335.00 |
| 规格： | 96 T(12308ES96) | 产品价格： | ￥19205.00 |
| 规格： | 1000 T(12308ES98) | 产品价格： | ￥217082.00 |
Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit是兼容Illumina和MGI双平台的total RNA测序文库构建试剂盒，包含RNA片段化试剂，反转录试剂，常规和链特异性ds-cDNA合成试剂，以及文库扩增试剂。可以衔接mRNA纯化试剂盒或rRNA去除试剂盒构建测序文库。二链合成模块配有两种Buffer，客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。其中链特异性二链合成Buffer中将dTTP替换为dUTP，使cDNA第二链中掺入dUTP，而本试剂盒使用的高保真DNA聚合酶无法扩增含尿嘧啶的DNA模板，实现链特异性。提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品信息
| 货号 | 12308ES08 / 12308ES24 / 12308ES96 |
| 规格 | 8 T / 24 T / 96 T |
组分信息
| 组分编号 | 组分名称 | 12308ES08 | 12308ES24 | 12308ES96 | |
| 12308-A |  |
2× Frag/Prime Buffer | 80 μL | 250 μL | 930 μL |
| 12308-B |  |
1st Strand Enzyme Mix | 16 μL | 48 μL | 192 μL |
| 12308-C |  |
Strand Specificity Reagent | 50 μL | 150 μL | 580 μL |
| 12308-D |  |
2nd Strand Buffer (dNTP) | 240 μL | 720 μL | 2×1440 μL |
| 12308-E |  |
2nd Strand Buffer (dUTP) | 240 μL | 720 μL | 2×1440 μL |
| 12308-F |  |
2nd Strand Enzyme Master Mix | 40 μL | 120 μL | 480 μL |
| 12308-G |  |
Ligation Enhancer | 240 μL | 720 μL | 2×1440 μL |
| 12308-H |  |
Novel T4 DNA Ligase | 40 μL | 120 μL | 480 μL |
| 12308-I |  |
2×Super Canace® II High-Fidelity Mix | 200 μL | 600 μL | 2×1200 μL |
| 12308-K |  |
Nuclease Free H2O | 100 μL | 300 μL | 1000 μL |
| 12308-* | * | Primer mix | NA | NA | NA |
| 注*：Primer mix为实验必须试剂，但是该成分不包含在本试剂盒，需要额外配置。本试剂盒组分兼容Illumina和MGI双平台，但需要额外配置专属于Illumina®或者MGI®的primer mix(Cat# 13335 Primer Mix for Illumina®以及Cat# 13334 Primer Mix for MGI®)。 | |||||
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
实验前请仔细阅读：
一、关于接头连接 (Adapter Ligation)
1. 本公司可提供Illumina®或者MGI®长接头(Barcoded Adapter)试剂盒和短接头试剂盒，客户可根据实验需求进行选择。
2. 我们建议选用高质量的商业化接头。如客户使用自制接头，请委托具有NGS引物合成经验的公司，并备注需进行严格的防污染控制。此外，进行接头退火操作时，请在超净台完成。每次只操作一种接头，防止交叉污染。
3. 使用接头时，请提前将接头取出放在4°C或冰盒上解冻；在室温操作时，实验室温度最好不要超过25°C，防止接头解链。
4. 建库过程中，接头浓度过高或过低都会导致建库成功率变低。本试剂盒操作方案中，所加入的接头体积固定为5 μL，请根据初始的RNA投入量，参考表1对接头进行稀释。接头稀释液请选择0.1×TE buffer，稀释过的接头可在4°C保存48小时。
表1-1 Input Total RNA量与Illumina®接头使用浓度推荐表
| Input Total RNA | Illumina® Adapter stock concentration |
| 10 ng | 1 μM |
| 100 ng | 1.5 μM |
| 500 ng | 3 μM |
| ≥1 μg | 5 μM |
表1-2 Input Total RNA量与MGI®接头使用浓度推荐表
| Input Total RNA | MGI® Adapter stock concentration |
| 100–499 ng | 2 μM |
| 500–4000 ng | 5 μM |
*可根据不同类型total RNA样本及投入量，按需求适当调整Adapter使用量
二、关于文库扩增 (Library Amplification)
1. 本试剂盒中的文库扩增组分由本公司第二代高保真DNA聚合酶所组成，在第一代的基础上，大大增强了扩增的均一性，即使是低拷贝的基因，也能进行无偏好性地扩增。
2. 文库扩增步骤需要严格控制扩增循环数。循环数不足，将导致文库产量低；循环数过多，又将导致文库偏好性增加、重复度增加、嵌合产物增加、扩增突变积累等多种不良后果。表2列举了使用本试剂盒进行文库扩增，Input Total RNA 量与相应扩增循环数的推荐。
3. 表2中推荐的循环数可满足绝大多数建库需求，若您的样本质量较差（如降解严重的FFPE样本），可根据实际情况适当增加循环数。mRNA建库时请特别注意，由于不同物种和组织所提取的 Total RNA中，mRNA的含量差异较大，实验中需根据建库起始量、物种类型及样本处理情况适当调整扩增循环数。
表 2 Input Total RNA 量与扩增循环数推荐表*
| Input Total RNA | Number of cycles | |
| Non-stranded | Stranded | |
| 10 ng | 15 | 15 |
| 100 ng | 14 | 14 |
| 500 ng | 12 | 13 |
| 1 μg | 11 | 12 |
【注】：*由于文库产量不仅与投入量和扩增循环数相关，样本质量、片段化条件、分选条件等都会影响产量。建库过程中请根据实际情况综合考虑，选择最合适的建库条件。
三、DNA磁珠纯化与分选 (Bead-based Clean Up and Size Selection)
1. 建库过程中有多个步骤需要使用DNA纯化磁珠，我们推荐使用Hieff NGS® DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601)或AMPure® XP磁珠(Beckman Cat#A63880)进行DNA纯化和分选。
2. 磁珠使用前应先平衡至室温，否则会导致得率下降、分选效果不佳。
3. 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。
4. 转移上清时，请勿吸取磁珠，即使微量残留都将影响后续文库质量。
5. 磁珠洗涤使用的80%乙醇应现用现配，否则将影响回收效率。
6. 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应；过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下，室温干燥3-5 min足以让磁珠充分干燥。
7. DNA纯化或长度分选产物如需保存，可使用0.1×TE Buffer洗脱，产物于4°C可保存2天，-20°C可保存1个月。
四、关于文库质检 (Library Quality Analysis)
1. 通常情况下，构建好的文库可通过长度分布检测和浓度检测来进行质量评价。
2. 文库浓度检测可使用：基于双链DNA荧光染料的方法，如Qubit®、PicoGreen®等；基于qPCR绝对定量的方法。
3. 推荐使用qPCR方法进行文库浓度检测：Qubit®等基于双链DNA荧光染料的浓度测定方法时，无法有效区分单端连接Adapter的产物、两端均未连接Adapter的产物及其他不完整双链结构产物；qPCR绝对定量基于PCR扩增原理，仅定量样品中两端Adapter完整的文库（即可测序的文库），可排除单端或双端都不连接Adapter的不可测序文库的干扰。
4. 文库浓度检测不可使用：基于光谱检测的方法，如NanoDrop®等。
5. 文库长度分布检测，可通过Agilent Bioanalyzer 2100等基于毛细管电泳或微控流原理的设备进行检测。
五、自备材料 (Other Material)
1. mRNA富集试剂盒：Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit V2 (Yeasen Cat#12629)。
2. rRNA去除试剂盒：Hieff NGS MaxUp Human rRNA Depletion Kit(rRNA & ITS/ETS) (Yeasen Cat#12257)或其他rRNA去除试剂盒。
3. RNA纯化磁珠： Hieff NGS® RNA Cleaner (Yeasen Cat#12602)或其他等效产品。
4. DNA纯化磁珠：Hieff NGS® DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601)或AMPure® XP Beads (A63880)或其他等效产品。
5. RNA质控：Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico Chip或其他等效产品。
6. Adapters：Complete Adapter for Illumina®使用（Cat#13519-13520或其他等效产品）或Complete Adapter for MGI®使用（Cat#13360-13362或其他等效产品）。
7. 文库质检：Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/ High Sensitivity Chip或其他等效产品；文库定量试剂。
8. 其他材料：无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。
六、建库流程图 
图1 RNA建库原图流程图
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- 内容
- 询问日期
文献和实验[1]Liu Y, Han R, Zhou L, et al. Comparative performance of the GenoLab M and NovaSeq 6000 sequencing platforms for transcriptome and LncRNA analysis [published correction appears in BMC Genomics. 2022 Jan 26;23(1):81]. BMC Genomics. 2021;22(1):829. Published 2021 Nov 17. doi:10.1186/s12864-021-08150-8(IF:4.547)
