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circRNA过表达及干扰

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  • 武汉
  • 2026年04月29日
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      cirRNA过表达及干扰载体设计与构建

    环状RNA(circRNA)是一类特殊的非编码RNA分子,也是RNA领域最.新的研究热点。与传统的线性RNA(linear RNA,含5’和3’末端)不同,circRNA是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴,并以共价键形成封闭环状结构,由非经典剪接方式进行反向剪接而形成。不受RNA外切酶影响,表达更稳定,不易降解。近几年的研究表明,circRNA在生物的生长发育、对外界环境的抵御、疼痛等方面具有重要的调控作用。circRNA功能众多,可作为miRNA的海绵,竞争性结合miRNA,发挥ceRNA的调控功能,调控基因表达。近年来还发现与疾病的发生和发展密切相关,在疾病诊断标记物等方向具有很大的应用前景。
     

    circRNA干扰服务

    RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术通过将与内源mRNA同源的小片段(19-23 bp)外源双链RNA(siRNA)导入细胞中,引发细胞中相应mRNA高效特异性降解,从而导致特定基因表达沉默或下调(knock down)。枢密科技针对circRNA的接头序列设计多条siRNA序列,筛选特异性高效干扰目的circRNA表达的siRNA,构建shRNA病毒载体并包装所需病毒。也可直接转染或通过包装慢病毒感染细胞筛选circRNA特异性敲低稳定细胞株。

     

    服务流程

    1、客户提交circRNA资料(ID号或者序列)、构建要求

    2、设计多条siRNA,筛选高效率干扰siRNA

    3、设计circRNA特异性引物,检测敲低circRNA的效率

    4、构建shRNA载体,干扰慢病毒或腺相关病毒包装

    5、稳定细胞株构建(可选,需要客户提供目标细胞)
     

    circRNA过表达服务

    目前枢密科技提供pAAV-ciR、pLV-ciR等circRNA过表达载体构建服务,同时可选择携带各种荧光报告基因或抗性基因,适用于普通真核表达、慢病毒包装与稳转细胞系建立、腺相关病毒包装等多种用途。该系列载体均含有circRNA环化表达框架,用于克隆目标circRNA的线性序列,之后转染细胞后可通过RNA剪切形成circRNA分子。

     

    服务流程

    1、客户提交circRNA资料(ID号或者序列)、构建要求

    2、circRNA过表达载体构建

    3、载体验证(根据客户选择,默认提供293细胞转染验证环化效果)

    4、病毒包装

    5、稳定细胞株构建(根据客户需要选择,需要客户提供目标细胞)
     

    circRNA慢病毒载体

    产品细节图片1

    circRNA腺相关病毒载体

    产品细节图片2

    产品细节图片3

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    • 环状RNA(circRNA)功能研究又一利器——过表达载体

      相关专题circRNAs 环状 RNA(circular RNAs,circRNA)是一类具有闭合环状结构的 RNA 分子,早在 20 世纪八十年代即有研究报道,但由于其表达丰度低,文献报道较少,一直被认为是 RNA 转录剪切的罕见错误而被忽视。直到 2012 年开始有研究者开始大批量鉴定 circRNAs,从古生菌、线虫、小鼠和人类细胞鉴定出大量 circRNAs,揭示 circRNA 大量存在于真核转录组中,是细胞基因表达的一个普遍现象,并可能发挥重要的生物学作用。进一步研究表明

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      miRNA海绵作用,进而间接调控miRNA下游靶基因的表达。 图三 miRNA海绵机制(图片来自网络) 调控基因转录,circRNA也可以通过与RNA结合蛋白的结合来调控蛋白功能,比如通过与转录因子的结合来抑制基因的转录。 编码功能,circRNA虽然属于非编码RNA,但是也有少数circRNA可以编码多肽,通过该多肽行使调控功能。 circRNA过表达:同上述的lncRNA步骤类似,但是circRNA过表达由于成环效率的影响,其难度相对普通基因的过表达更大。 circRNA干扰

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