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- 2026年04月20日
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BrainVTA
- 服务名称：
lncRNA过表达及干扰载体设计与实验
简介
长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）是一类长度大于200nt的非编码RNA分子，主要位于细胞核中，少量位于细胞质内。lncRNA在基因表达调控、物种进化、胚胎发育、物质代谢以及肿瘤发生等过程中均具有重要作用。
根据它们在基因组上相对于蛋白编码基因的位置，主要可以分为以下5种，其所在的位置与其功能有一定的相关性。
| 类别 | 描述 |
|---|---|
| 正义lncRNA | 与编码基因的一个或多个外显子重叠 |
| 反义lncRNA | 与相反链上的转录产物部分或完全互补 |
| 内含子lncRNA | 由基因的内含子产生 |
| 双向转录产物 | 与蛋白质编码基因共享相同的启动子，但转录方向相反 |
| 基因间 lncRNA | 由位于蛋白质编码基因之间的序列独立转录 |
lncRNA的主要作用机制
（1）通过在蛋白编码基因上游启动子区发生转录，干扰下游基因的表达；
（2）通过抑制RNA聚合酶Ⅱ或者介导染色质重构以及组蛋白修饰，影响下游基因表达；
（3）通过与蛋白编码基因的转录本形成互补双链，进而干扰mRNA的剪切，从而产生不同的剪切形式；
（4）通过与蛋白编码基因的转录本形成互补双链，进一步在Dicer酶作用下产生内源性的siRNA，调控基因的表达水平；
（5）通过结合到特定蛋白质上，lncRNA转录本能够调节相应蛋白的活性；
（6）作为结构组分与蛋白质形成核酸蛋白质复合体；
（7）通过结合到特定蛋白上，改变该蛋白的胞质定位；
（8）作为小分子RNA，如miRNA、piRNA的前体分子转录。
lncRNA在胚胎发育、谱系分化、基因印迹、疾病发生等过程中都发挥着非常重要的调控作用，是转录调控的重要分支及热点。随着转录组学高通量测序技术的日臻完善，越来越多的lncRNA被发现。但是目前对lncRNA的认知还处在初级阶段，仍需要探索。
lncRNA的功能检测
lncRNA的功能研究主要采用敲减，过表达等实验手段。lncRNA的敲减是利用RNA干扰(RNA interference, RNAi)方法,即由小干扰RNA(small interfering RNAs, siRNAs)和短发夹RNA(short hairpin RNAs, shRNAs)介导的特异性降解同源RNA,该方法是lncRNA功能研究中最主要、最常见的技术之一。由于绝大多数lncRNA的表达丰度偏低,在组织细胞中过表达lncRNA也是研究其功能的一个有效策略。
服务说明
枢密科技提供rAAV-LncRNA、rLV-LncRNA等lncRNA过表达载体和干扰载体构建服务，同时可选择携带各种荧光报告基因或抗性基因，适用于普通真核表达、腺相关病毒包装、慢病毒包装与稳转细胞系建立等多种用途。
服务流程
1、客户提交lncRNA资料（ID号或者序列）、构建要求
2、lncRNA过表达载体构建
3、病毒包装
4、稳定细胞株构建（根据客户需要选择，需要客户提供目标细胞）
载体选择
lncRNA敲减服务注意事项
1. 大部分lncRNA的本底表达丰度偏低，在进行干扰服务之前需检测本底表达情况。
2. 不是所有lncRNA通过shRNA敲减技术就能达到期望的干扰效果。一方面大部分lncRNA分布在细胞核内，而RISC沉默复合物主要在细胞质里面，针对细胞核里面的lncRNA，目前的shRNA技术达不到干扰效果。另一方面有些细胞质的lncRNA也存在难以敲降的情况，lncRNA设计6-8条筛选不出来有效的干扰序列，那么可以判定该lncRNA很难被敲低。针对此情况建议采用siRNA（反义核酸），Cas13d等方式进行抑制。
交付内容
1. 质检报告
2. 测序文件
3. 过表达、干扰质粒/病毒/稳定细胞系
参考文献
1. Ling-Ling Chen.（2015）.Linking Long Noncoding RNA Localization and Function. Trends in Biochemical Sciences.
2. Ming-zhe Ma, Yan Zhang.,et al.(2016).Long Noncoding RNA GCASPC, a Target of miR-17-3p, Negatively Regulates Pyruvate Carboxylase–Dependent Cell Proliferation in Gallbladder Cancer. Cancer Research.
3. XIA Tian, XIAO Bing-Xiu.,et al.(2013).Acting mechanisms and research methods of long noncoding RNAs. HEREDITAS
4. Feng Yang, Fan Yi.,et al.(2014)The emerging landscape of long non-coding RNAs. HEREDITAS
5.Johnny T. Y. Kung, David Colognori.,et al.(2013).Long Noncoding RNAs: Past, Present, and Future. Genetics.
6.Longyang Jin, Qiang Cai.,et al.(2018) .Long noncoding RNA MEG3 regulates LATS2 by promoting the ubiquitination of EZH2 and inhibits proliferation and invasion in gallbladder cancer. Cell Death & Diseasevolume.
7. Yiwen Fang,Melissa J.,et al.(2016)Roles, Functions, and Mechanisms of Long Non-coding RNAs in Cancer.Genomics, Proteomics & Bioinformatics.
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文献和实验。 特点 1. 长度在200-100,000nt 2. 没有编码蛋白质潜能 3. 具有细胞或组织类型特异性 4. 表达量和保守性比mRNA低 5. 部分lncRNA不含有polyA尾巴 6. 部分也会翻译小肽段 • LncRNA功能及作用形式 功能 1. 结合转录因子，干扰其靶基因，从而调控转录 2. 作为分子海绵，吸附miRNA 3. 与调节蛋白结合，影响蛋白多聚物的形成 4. 招募染色质修饰因子，改变染色
；2）lncRNA能够通过封阻启动子区域来干扰基因的表达；3）lncRNA能够与RNA结合蛋白作用，并将其定位到基因启动子区从而调控基因的表达；4）lncRNA能够调节转录因子的活性；5）lncRNA也能够通过调节基本转录因子来实现调控基因的表达。 转录后调控：lncRNA能够在转录后水平通过与mRNA形成双链的形式调控基因的表达。 lncRNA过表达：将lncRNA序列构建入病毒载体中，该载体既可用于瞬时转染细胞，也可以包装成病毒用于稳定株筛选和动物水平过表达lncRNA。 lncRNA干扰：针
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