- ￥1268
- 博尔森/BIOESN
- BES21357KB
- 中国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
High MW non-denaturing protein Marker
- 保质期：
24 个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
20T
高分子量非变性电泳蛋白Marker（66-669 kD，5条带）
储存条件：注：配制好的蛋白 Marker-20℃保存，有效期为 24 个月。
产品内容：
产品说明：
本产品是 5 种高纯蛋白质干粉混合物，总蛋白含量为 250μg。具体蛋白含量如下：
操作说明：
1. 取 100μl 非变性蛋白上样缓冲液(1×)加入到蛋白干粉混合物中，彻底混匀融化后，-20℃贮存。
2. 常温融化后，彻底混匀，上样电泳。
注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，0.75mm×5mm（厚度×宽度）的加样孔上样 5 μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
3. 电泳结束后，染色，观察结果。
注：使用银染时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，可以适当降低 Marker 上样量，一般稀释 50 倍。
注意：
1. 本蛋白 Marker 不适用于变性蛋白电泳（SDS-PAGE），因为在 SDS 存在下，含有多个亚单位的蛋白会不同程度解聚。
2. 在非变性条件下，蛋白的迁移与蛋白的电荷、蛋白形状以及蛋白分子量都有关。因此，在一种凝胶浓度下使用本 Marker 不能精确估计出目的蛋白的分子量。非变性电泳中，蛋白分子量的确定应该是在不同凝胶浓度下，确定出蛋白的 Rf 值，绘制出凝胶浓度对 Rf 的曲线从而判定蛋白的分子量。
电泳条件：
5-12% 聚梯度胶 厚 1mm
Tris-甘氨酸不连续系统
150V 稳压电泳
考马斯亮蓝 G250 染色
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
3 个目的条带，而第二张图 6 个目的条带全部可以看到。 而造成这样大反差的根本原因就在于 Marker 了。为什么会这样呢？有三个很重要的原因。 第一，选择的抗体不是单克隆抗体。 第二，该抗体和 Marker 的结合力太强了，远远超过了跟目的蛋白的结合力。 第三，我们使用的成像系统并不能像人一样识别哪些是目的条带，哪些是非目的条带，为了保证成像区域不至于过度曝光，成像系统会严格地控制曝光时间，在特定的曝光时间下，尽管成像区域没有因为过度曝光而导致影像失常，但信号相对较弱的目的条带却因为没有足够的曝光
【求助】180KD的膜蛋白western转膜条件怎样？（湿转）
zhywang4072 鄙人现在做一180KD的蛋白，之前转PVDF膜用的是100v两个半小时，预染marker转得很漂亮，内参也很不错，但是目标蛋白条带却没有，请教各位大侠，这是什么原因？还有诸位大蛋白转膜时候条件怎样？我用的是湿转，谢谢 wodezxn 我觉得100V2h肯定是足够了，没转上应该是你目的蛋白的问题，可能是蛋白表达量太少或者你提蛋白的时间有问题。 zhibinx2007
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