- ￥248
- 博尔森/BIOESN
- BES20285KB
- 中国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
1M Sorbitol Solution
- 保质期：
1 年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
4℃
- 规格：
100mL
1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液（过滤除菌）
储存条件：4℃保存，有效期 1 年。
产品内容：
产品说明：
1M 的山梨醇一般用于酿酒酵母或者裂殖酵母电转感受态的制备。
酵母感受态细胞的制备：
1. 活化菌种。-80℃保存的菌种在固体 YPDA 培养基（YPDA 加 20g Agar/L）上划线，在 30℃培养 2-4 天。
2. 挑取酵母单菌落在固体 YPDA 培养基上划 3-5 mm 的短线，在 30 ℃培养 2-4 天。待酵母单菌落长至 2 mm长时，接种。
3. 首先把酵母细胞接种到 50 ml 液体 YPDA 培养基的三角瓶中继续培养，待 OD600 到 1.3-1.5 范围内。
4. 将酵母菌置于冰上放置 10 min 后，收集细胞。1000 g，离心 5 min, 去上清。
5. 沉淀用 30-50 ml 的预冷的无菌水悬浮。1000 g，离心 5 min，去上清。重复洗涤 2 次。
6. 沉淀用 5mL 冰上预冷的 1M 山梨醇溶液重悬。1000 g，离心 5 min，去上清。
7. 沉淀用 0.4 mL 的预冷的 1M 山梨醇溶液重悬，按照 40 uL 分装。
酵母转化：
1. 在 40uL 的酵母感受态细胞中，加入 5uL（100ng）的质粒，混匀。
2. 转移到预冷的电转槽中，电击。
3. 在电转槽中加入 500uL 预冷的 1M 山梨醇溶液，轻柔混匀。
4. 涂布于相应的筛选培养基上，28-30℃培养 3-5 天。
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文献和实验10μl），轻弹混匀，尽数吸出转移到0.2cm型的电穿孔转化杯中； 2) 转化杯置于冰浴中5～10分钟，保持低温。 3) 电穿孔转化电击条件：电压：1500V；电阻：400Ω；电容：25μF；脉冲时间：10mS；一次电击。 4) 电击后，马上在电击转化杯中加入1ml 4℃预冷的1M的山梨醇溶液，用微量移液枪吹打均匀，置于冰浴中； 5) 取30℃烘至表面半干的MD培养基平板，在超净工作台上无菌操作涂布平板，400μl/板
4) 电击后，马上在电击转化杯中加入1ml 4℃预冷的1M的山梨醇溶液，用微量移液枪吹打均匀，置于冰浴中; 5) 取30℃烘至表面半干的MD培养基平板，在超净工作台上无菌操作涂布平板，400μl/板
【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤！！！（从验证到阳性克隆的筛选）
、Sal1 山梨醇 质粒抽提液：溶液1，溶液2，溶液3 酚：氯仿（1：1） rTaq、dNTP（2.5mM）、10×Buffer 上游引物VP5(25nmol/L):5’-TAGAATTCGCACCCATGGCAGAAGGAGG-3’ 下游引物VP3(25nmol/L):5’-TAGCGGCCGCTTACCGCCTCGGCTTGTC-3’ 4．仪器 电穿孔仪：Bio－Rad公司产品 Power/Pac 1000型电泳仪：Bio－Rad公司产品 Mini－垂直电泳槽：Bio－Rad
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