软骨组织RNA提取试剂盒

软骨组织RNA提取试剂盒

保存条件：常温保存，保质期 2 年。

产品内容：

 

产品说明：

软骨组织 RNA 提取试剂盒用于从各种软骨组织样品中快速提取总 RNA 的试剂盒，它能有效克服传统 TRIzol 方法提取软骨组织RNA 时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

操作步骤：（样品裂解，样品纯化，RNA 收集）

离心条件均优先选择 4℃，室温离心也可以。

一：样品裂解

1. 液氮研磨法

将 50-200 mg 新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入 1mL 裂解液重悬后，将裂解物加入 1.5mL 离心管中，震荡混匀 1min。

注意：低温可能导致裂解液有白色悬浮物，请置于 65℃水浴充分溶解后使用。

裂解液含巯基乙醇，请于通风橱内操作。

二：样品纯化

1. 在裂解物中加入 0.3 mL 的 RNA 纯化液 和 0.2 mL 自备氯仿，在震荡器上震荡 30 s，溶液呈均匀的乳浊状。

2. 12,000rpm 离心 3-5min，取上清到新的 1.5mL 离心管中（避免触及分层界面，下层会有大量 DNA 和蛋白污染，避免污染。）

3. 上清中加入等体积的 RNA 结合液，颠倒混匀，分两次加入同一个 RNA 纯化柱中（如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中）。12,000rpm 离心 1min，弃穿透液。

4.在纯化柱中加入 0.5mL RNA 洗涤液，室温 12,000rpm 离心半分钟，弃穿透液。重复洗涤一次。（洗涤液使用后拧紧瓶盖，防止挥发）。

三：RNA 收集

1. 将结合有 RNA 的纯化柱 12,000rpm 离心 1min，甩干乙醇。（乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验，或者适当延长离心时间，将有助于乙醇的去除）

2. 弃收集管，将柱芯转移到 1.5mL 的 RNase-free 离心管中（自备），加入30-50uLRNA 溶解液，室温放置 1 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟洗脱 RNA。得到的 RNA 可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。

3. 如果要提高 RNA 产量，加入 30-50uLRNA 溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高 RNA 浓度，使用第一次的洗脱液 加回到吸附柱中重复洗脱。

注意：建议 RNA 用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的 28S 和 18S 条带，以及中间弥散的 mRNA 条带，其中 28S条带是 18S 条带亮度的 1.5-2 倍。有时还包括跑在最前面的较暗的 5S 条带。

如果条带不清晰或者弥散，可能是提取过程中或者材料保存过程中 RNA 发生了降解。小于 200bp 的 RNA 分子不能有效结合到吸附柱上。A260/A280 比值1.8~2.0 对应 RNA 纯度 90-100%之间。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！