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提供N端测序服务
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N端测序
方法:蛋白质多肽N端自动测序仪
原理:Edman降解 蛋白质的α氨基与PITC在弱碱性条件下形成(PTC-)衍生物,后者在无水TFA下裂解,释放出N端的(ATZ-)氨基酸,然后转化成(PTH-)氨基酸,这些衍生物可用HPLC法加以鉴定。 仪器:ABI 491A 蛋白测序仪 岛津PPSQ-33A 蛋白测序仪 样品要求: 1、样品状态:可以是干粉,溶液或固定在PVDF膜上(转膜的蛋白质分子量<40kD,建议丽春红染色),注意不要使用NC膜(硝酸纤维素膜)替代。 2、样品浓度及纯度:N端测 总量>50pmol;纯度>90%;浓度>1mg/ml 3、含盐量:挥发性无机盐<20mM;不挥发性无机盐<5mM; 请务必标明样品缓冲液的成分,建议不使用Tris缓冲体系 4、请务必告知样品表观分子量范围 常见影响测试的情况: 1、样品纯度不足 2、含盐过多导致无结果,甚至损坏仪器 3、样品量太少导致无结果 4、若蛋白质出现糖基化或N端被封闭,不能用此方法进行测试;
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