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- 2026年01月07日
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上海中科新生命生物科技有限公司
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双向凝胶电泳
双向凝胶电泳是将不同种类的蛋白质按照等电点和分子量差异进行高分辨率分离的分析方法。成功的二维电泳可以将2000到3000种蛋白质进行分离，是目前唯一的同时能分离成百上千种蛋白质的工具。通过对蛋白质双向电泳的图谱扫描，用相关软件（PDQUEST等）进行图谱差异分析，找到差别点。然后把差别点切出，进行脱色、酶解。最后样品进入质谱测试，得到质谱原始数据文件。通过搜库可得到差别点蛋白质的详细信息。
原理： 1、根据蛋白质的等电点（第一向）和分子量（第二向）的不同进行分离。 2、电泳后根据蛋白质的上样量对胶进行考马斯亮兰染色、银染或荧光染色，然后用相关软件对电泳图象进行分析。
样品要求： 1、建议使用的蛋白质溶解体系为8M 尿素/4%CHAPS /40mMTris（Base）/65mM DTT； 2、样品浓度大于2 ug/ ul；由于蛋白质组学涉及的样品范围很广，对于具体样品的要求请和项目经理联系。
仪器：
第一向IEF：Ettan IPGphor Isoelectric Focusing System （GE Amersham）
第二向SDS-PAGE：Hofer SE 600（GE Amersham）
扫描仪：UMax Powerlook 2110XL（GE Amersham）
分析软件：Image master 2D Elite®
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文献和实验先将混合物在一个直径1mm的玻管凝胶中进行等电聚焦凝胶。聚焦后将凝胶条小心的从毛细管中取出，然后放到另一平板凝胶的顶部（垂直板）或一端（水平板），再让胶条中已经分离的组分在平板胶中走SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。由于蛋白质的等电点和分子质量之间没有什么必然的联系，因此，经过双向电泳可将数千种蛋白质分开，显示出极高的分辨力。
反应，如磷酸化、羟基化、糖基化、二硫键形成，以及最近发现的蛋白质自剪接等等，可能有一百种以上。翻译后修饰和加工对蛋白质的正常生理功能是必需的，它们的变化往往和疾病的发生有关。用双向凝胶电泳可以进行翻译后修饰的研究，如用32P标记可以研究磷酸化蛋白的变化。双向凝胶电泳中常可发现的蛋白质拖曳现象，很可能是一个蛋白的不同翻译后修饰产物所造成的。拖曳图像变化在疾病诊断上可能提供重要的信息。双向凝胶电泳技术当前面临的挑战是：(1)低拷贝蛋白的鉴定。人体的微量蛋白往往还是重要的调节蛋白。除增加双向凝胶电泳灵敏度的方法
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