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蛋白质的二硫键定位
方法:质谱法
原理:非还原状态下,用IAA将蛋白质游离的Cys封闭,再分别用trypsin、chymotrypsin或Glu-C进行酶切。酶解产物通过色谱分离和质谱检测后进行分析,通过匹配所得到的MS/MS图谱,找出二硫键连接的肽段,确定二硫键的配对方式.
仪器仪器:Thermo LTQ-Velos
样品要求:含盐量:挥发性无机盐<20mM;不挥发性无机盐<5mM;样品蛋白质总量>2mg;样品纯度>90%;样品应尽量保持其纯度不要添加任何保护剂或其他物质。
原理:非还原状态下,用IAA将蛋白质游离的Cys封闭,再分别用trypsin、chymotrypsin或Glu-C进行酶切。酶解产物通过色谱分离和质谱检测后进行分析,通过匹配所得到的MS/MS图谱,找出二硫键连接的肽段,确定二硫键的配对方式.
仪器仪器:Thermo LTQ-Velos
样品要求:含盐量:挥发性无机盐<20mM;不挥发性无机盐<5mM;样品蛋白质总量>2mg;样品纯度>90%;样品应尽量保持其纯度不要添加任何保护剂或其他物质。
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