QuDye 蛋白质定量试剂盒（针对 Qubit® 优化）

QuDye 蛋白质定量试剂盒（针对 Qubit® 优化）详细如下：
该试剂盒包括浓缩的 200x 测定试剂、稀释缓冲液和针对测量领域优化的 0、200 和 400 ng/uL 蛋白质标准品。根据蛋白质类型的不同，该测定具有低变异性，并且可以耐受污染物，如还原剂、核苷酸、游离氨基酸 DNA，但不能耐受去污剂。所有试剂都经过优化，可使用 Qubit™ 荧光计进行测量。该试剂盒允许在 12.5 µg/mL 至 5 mg/mL 范围内对初始样品进行准确的蛋白质定量（使用 Qubit™ 测量的蛋白质含量范围：200 µL 测试样品中的蛋白质含量为 0.25-5 µg）。实验在室温下进行，信号稳定3小时。
当使用相同的缓冲液来计算背景和制备样品时，测量的质量甚至会更高。
该套件允许简单地稀释试剂浓缩物并开始您的测量。Qubit® 仪器允许读取体积为 1–20 uL 的样本。 ！使用 QuDye 蛋白质定量试剂盒进行的所有测量都应在室温 (22–28 ºС) 下进行。在开始之前，将所有试剂盒的溶液平衡至室温。避免加热样品，因为样品温度会影响测量结果；特别是在使用 Qubit™ 荧光计进行荧光测量之前，请勿将分析管握在手中。
 

协议

1. 考虑到每个样品和三个标准中的每一个都需要 200 μL 的染料工作溶液，准备QuDye 蛋白质染料工作溶液。为此，使用QuDye 蛋白缓冲液将QuDye 蛋白浓缩液稀释 200 倍。
    
   例如，要测量 2 个样品和 3 个标准品，制备 200 μL x 5 = 1000 μL 染料工作溶液（混合 5 μL QuDye 蛋白试剂浓缩物和 995 μL QuDye 蛋白缓冲液）。
    
   ！建议在配制后数小时内使用染料工作液。在延迟测量的情况下，保护准备好的染料工作溶液免受光照。
    
   ！仅使用塑料容器制备染料工作溶液，因为 QuDye 蛋白试剂可以吸附到玻璃表面，导致样品中染料浓度降低，测量结果出现偏差。
2. 为标准设置三个 0.5 ml 管（薄壁和光学透明），为每个样品设置一个管。标记管盖。不要标记试管的侧面，因为这会干扰样品读取。
3. 将 190 µL  QuDye 蛋白质染料工作溶液添加到用于标准的三个试管中，并将每个蛋白质标准的 10 µL添加到适当的试管中。涡旋 2-3 秒并短暂离心。
4. 将 180–199 µL  QuDye 蛋白质染料工作溶液分别添加到用于样品的每个试管和 20–1 µL 蛋白质样品中（总体积应为 200 µL）。涡旋 2-3 秒并短暂离心。
    
   实验样品的稀释是可选的，取决于其初始浓度。初始样品浓度可以从 12.5 到 5000 µg/mL 不等；然而，在用 QuDye 蛋白质染料工作溶液稀释后，蛋白质的量应对应于 Qubit™ 荧光计的测量范围（200 μL 测试样品中含有 0.25-5 μg 蛋白质）。因此，应将具有可接受的最低初始蛋白质浓度 (12.5 µg/mL) 的样品稀释 10 倍至 1.25 µg/mL [将 180 µL 染料工作溶液和 20 µL 样品 (12.5 µg/mL) 放入测定管，相当于 0.25 µg 蛋白质]。具有最大可接受初始蛋白质浓度 (5000 µg/mL) 的样品应稀释 200 倍 [将 199 µL 染料工作溶液和 1 µL 样品 (5000 µg/mL) 放入测定管中，相当于 5 µg 蛋白质]。但是，在稀释初始样品时避免使用太小的体积，以保持测量的准确性和精密度。
5. 将所有试管（包含标准品和蛋白质样品）在室温下孵育 15 分钟。
6. 执行荧光测量。

使用 Qubit™ 荧光计进行荧光测量

后续步骤应根据 Qubit™ 荧光计的说明进行。根据荧光计的版本，菜单项可能与下面指定的不同。
 

1. 在 Qubit™ 荧光计的主屏幕上，选择 «Quant – It Protein» 作为检测类型。按«开始»
2. 每次制备染料工作溶液时，校准荧光计。选择«运行新校准»并按«开始»。
3. 将含有Standard #1（0 ng/uL，TE 缓冲液）的试管插入样品室，盖上盖子，然后按 «Go»。读取完成后（约 3 秒），移除Standard #1。
    
   将含有Standard #2（TE 缓冲液中 BSA 200 ng/uL） 的试管插入样品室，盖上盖子，然后按 «Go»。读取完成后，移除 Standard #2。
    
   将含有Standard #3（TE 缓冲液中的 BSA 400 ng/uL） 的试管插入样品室，盖上盖子，然后按 «Go»。读取完成后，移除Standard #3。
4. 将装有用户样品的试管插入样品室，盖上盖子，然后按 «Go»。在屏幕上您将看到 QF 值。
    
   通过公式计算蛋白质样品的浓度：样品浓度 = QF 值 x 200/样品体积。