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- 2026年02月06日
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君礼生物
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继m6A甲基化修饰之后，2018年11月15日，美国国立卫生研究院（NIH）的Shalini Oberdoerffer研究组在Cell杂志在线发表题为：Acetylation of Cytidine in mRNA Promotes Translation Efficiency的研究论文，该论文揭示N4-乙酰胞苷（ac4C）由乙酰转移酶NAT10催化的mRNA修饰，证明mRNA乙酰化在体外和体内增强底物翻译。
本检测采用本公司自研的 m6A/Ac4C RNA甲基化定量检测试剂盒，通过比色的方法定量总RNA中m6A/Ac4C 的甲基化或乙酰化程度，适用于哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒等物种。
检测原理是在特定的结合缓冲液中，将待检测的total RNA/mRNA或者标准品结合到微孔板表面，然后依次加入特异性的m6A/Ac4C捕获抗体、检测抗体和显色试剂，最终显示的颜色深浅与样品中m6A/Ac4C的浓度呈正比，利用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线即可计算样品中m6A/Ac4C的绝对含量，同时通过total RNA总量校正可对不同样本中m6A/Ac4C含量进行比较。
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文献和实验性和扩增长度 为了说明GeneRacer™试剂盒获取全长5’末端的能力，我们扩增了带有已知转录起始位点的基因的5’末端。使用总RNA，遵循GeneRacer™步骤，我们扩增了一个长转录本（9kb）和一个浓度为0.01%，即30拷贝/细胞的稀有mRNA（见图2 ）。 图二 稀有转录本和长转录本的扩增结果 3.5μg Hela总RNA经GeneRacer™步骤处理，利用GeneRacer™的Oligo dT引物和SuperScriptⅡ™得到cDNA，然后使用GeneRacer™ 5’引物和基因
（Promega）；Genomyx LR 、 Genomyx SC、DNAThermal Cycler（Perkin Elmer）1.3 总RNA的制备按试剂盒提供的方法分别提取三种细胞的总 RNA,以 RNase-free DNase I（终浓度80 000 U/L）除去其中污染的 DNA,经甲醛变性凝胶电冰鉴定其完整性，并以紫外分光光度计检 测其纯度1.4 mRNA差异显示1.4.1 逆转录反应选择锚定引物[T7（dT12）AP(anchored prime rs，AP)]，序
。 是指合成cRNA内参照的定量PCR，其基本方法是首先构建一个内参模板的质粒，在它的T7启动子下游依次排列有若干个不同的靶mRNA的5端引物序列，接下来排列有相对应的若干个3端引物序列及PolyA序列。用T7聚合酶转录cRNA，利用其cRNA的PolyA经oligo(dT)纯化后测定含量，再与靶基因的总RNA一起进行逆转录，将两者的逆转录产物作为模板一起作PCR扩增，并用同位素末端标记。由于两者扩增产物条带大小不同，因此可在PAGE电泳凝胶中区分开来，将扩增条带回收后，分别测定其放射活性
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