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circRNA成环验证
一、技术简介
circRNA（环状RNA）是一类特殊的非编码RNA分子，主要位于细胞质或储存在外泌体中，广泛存在于真核生物中，来源于基因的外显子或者内含子区域，在哺乳动物细胞中大量存在。与传统的线性RNA不同，circRNA没有5’帽子和3’poly（A）尾巴结构，呈封闭环状结构，不受RNA外切酶影响，表达更稳定，不易降解。
circRNA由于其表达的特异性和调控的复杂性，以及在疾病发生中的重要作用越来越受到大家的重视。就像miRNA和长链非编码RNA一样，circRNA已经成为RNA领域的一个研究热点。
二、实验流程
1.琼脂糖凝胶电泳实验
分别用Divergent primer 和Convergent Primer 检测cDNA样品和gDNA样品。对照组为GAPDH。
分别使用Divergent Primer和Convergent Primer在cDNA和gDNA中检测circRNA和GAPDH。在cDNA中以Divergent Primer能检测到对应大小的条带，与Convergent Primer检测到的条带大小不同；在gDNA中以Divergent Primer检测不到对应大小的条带，表明circRNA是反向成环的。
2. R Nase R实验
分组：加入R Nase R的消化组和不加R Nase R的对照组
实验：检测上述circRNA和对应的母本基因（mRNA）表达量。
3.Sanger 测序
Sanger测序确认circRNA的 Splice Junction序列，将PCR的扩增产物进行sanger测序实验。
三、参考案例 
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文献和实验[1]Pan Z, Zheng J, Zhang J, Lin J, Lai J, Lyu Z, Feng H, Wang J, Wu D, Li Y. A Novel Protein Encoded by Exosomal CircATG4B Induces Oxaliplatin Resistance in Colorectal Cancer by Promoting Autophagy. Adv Sci (Weinh). 2022 Dec;9(35):e2204513. doi: 10.1002/advs.202204513. Epub 2022 Oct 26. PMID: 36285810; PMCID: PMC9762280.
[2]Zhang X, Jiang M, Niu W, Xu B, Zhang C, Yang M, Hu S, Niu C. CircPRKD3-loaded exosomes concomitantly elicit tumor growth inhibition and glioblastoma microenvironment remodeling via inhibiting STAT3 signaling. Neuro Oncol. 2025 Sep 17;27(8):1987-2005. doi: 10.1093/neuonc/noaf019. PMID: 39868921; PMCID: PMC12448806.
Nat Methods：陈玲玲/杨力/李劲松等开发新技术，实现环状 RNA 功能性筛选和研究
using the CRISPR-Cas13 system 的 circRNA 最新研究成果。 （图源：Nature Methods 官网）CRISPR-Cas13 系统，能否通过 gRNA 靶向 circRNA 的反向剪接位点（BSJ）实现区分 circRNA 和其同源线性 mRNA 尚未可知。为回答上述问题，研究团队首先对 Cas13 家族蛋白（Cas13a，Cas13b，Cas13d）进行筛选，确定 circRNA 敲除的效果。 （图源：Nature Methods 官网）分别验证
素酶检测。 3. circRNA: circRNA即环形RNA（circular RNA）的简称，是一类不具有5’末端帽子和3’ 末端poly（A）尾巴、并以共价键形成环形结构的客观存在于生物体内的非编码RNA分子。 circRNA主要特征： circRNA由特殊可变剪切产生，大量存在与真核细胞的细胞质中，主要来源于外显子，少部分内含子来源的circRNA存在细胞核中。 表达水平具有种属、组织、时间特异性。 circRNA呈闭合环状结构，不易被核酸外切酶降解，比线性RNA更加稳定。 具有一定序列保守
病毒刺突蛋白（Spike）受体结构域（RBD）的环状 RNA 疫苗。 实验证明，该疫苗可以在小鼠和恒河猴体内诱导产生高水平的新冠病毒中和抗体以及特异性 T 细胞免疫反应，并可以有效降低新冠病毒感染的恒河猴肺部的病毒载量，显著缓解新冠病毒感染引起的肺炎症状。 CircRNA 疫苗接种在小鼠和恒河猴体内提供了显著性保护 二、环状 RNA 疫苗的优势 一系列的对比评估表明，与 mRNA 疫苗相比，circRNA 疫苗具有以下特点或优势： 1）circRNA 具有更高的稳定性，可以在体
