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研载生物
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circRNA成环验证
一、技术简介
circRNA（环状RNA）是一类特殊的非编码RNA分子，主要位于细胞质或储存在外泌体中，广泛存在于真核生物中，来源于基因的外显子或者内含子区域，在哺乳动物细胞中大量存在。与传统的线性RNA不同，circRNA没有5’帽子和3’poly（A）尾巴结构，呈封闭环状结构，不受RNA外切酶影响，表达更稳定，不易降解。
circRNA由于其表达的特异性和调控的复杂性，以及在疾病发生中的重要作用越来越受到大家的重视。就像miRNA和长链非编码RNA一样，circRNA已经成为RNA领域的一个研究热点。
二、实验流程
1.琼脂糖凝胶电泳实验
分别用Divergent primer 和Convergent Primer 检测cDNA样品和gDNA样品。对照组为GAPDH。
分别使用Divergent Primer和Convergent Primer在cDNA和gDNA中检测circRNA和GAPDH。在cDNA中以Divergent Primer能检测到对应大小的条带，与Convergent Primer检测到的条带大小不同；在gDNA中以Divergent Primer检测不到对应大小的条带，表明circRNA是反向成环的。
2. R Nase R实验
分组：加入R Nase R的消化组和不加R Nase R的对照组
实验：检测上述circRNA和对应的母本基因（mRNA）表达量。
3.Sanger 测序
Sanger测序确认circRNA的 Splice Junction序列，将PCR的扩增产物进行sanger测序实验。
三、参考案例
circRNA（环状RNA）是一类特殊的非编码RNA分子，主要位于细胞质或储存在外泌体中，广泛存在于真核生物中，来源于基因的外显子或者内含子区域，在哺乳动物细胞中大量存在。与传统的线性RNA不同，circRNA没有5’帽子和3’poly（A）尾巴结构，呈封闭环状结构，不受RNA外切酶影响，表达更稳定，不易降解。
circRNA由于其表达的特异性和调控的复杂性，以及在疾病发生中的重要作用越来越受到大家的重视。就像miRNA和长链非编码RNA一样，circRNA已经成为RNA领域的一个研究热点。
二、实验流程
1.琼脂糖凝胶电泳实验
分别用Divergent primer 和Convergent Primer 检测cDNA样品和gDNA样品。对照组为GAPDH。
分别使用Divergent Primer和Convergent Primer在cDNA和gDNA中检测circRNA和GAPDH。在cDNA中以Divergent Primer能检测到对应大小的条带，与Convergent Primer检测到的条带大小不同；在gDNA中以Divergent Primer检测不到对应大小的条带，表明circRNA是反向成环的。
2. R Nase R实验
分组：加入R Nase R的消化组和不加R Nase R的对照组
实验：检测上述circRNA和对应的母本基因（mRNA）表达量。
3.Sanger 测序
Sanger测序确认circRNA的 Splice Junction序列，将PCR的扩增产物进行sanger测序实验。
三、参考案例
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