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研载生物
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聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)
一、技术简介
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因扩增至百万倍,使肉眼能直接观察和判断。聚合酶PCR实验从微量物质甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。
类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:
模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备。
模板DNA与引 物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
引物的延伸:DNA模板-引物结合 物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的”半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
二、实验流程
1. 预变性。
2. 循环:包括三个步骤(DNA变性,引物退火,引物延伸)。
3. 最后延伸。
三、服务说明及结果
1. 客户提供:样本材料。
2. 公司提供:电泳图、完整报告。
3. 实验周期:5个工作日。
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文献和实验[1]Tang R, Mao C, Hu C, Liu W, Bai J, Wang Y, Yang L, Qi H. Exosome membrane-biomimetic nanomedicine targets the pre-metastatic niche via NF-κB inhibition to suppress breast cancer lung metastasis. Mater Today Bio. 2026 Jan 31;37:102856. doi: 10.1016/j.mtbio.2026.102856. PMID: 41696155; PMCID: PMC12906025.
The Polymerase Chain Reaction (PCR)
Topics • What is the Polymerase Chain Reaction? • History and (pre-history) of PCR • How PCR works • Optimising PCR • Fidelity, errors and cloning • PCR primer design • Applications of PCR What is the Polymerase Chain Reaction? • It’s
多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术
多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最为广泛的方法之一,并使得很多以往无法解决的分子生物学研究难题得以解决。发明这一技术的K. Mullis因此贡献而获得了1993年度诺贝尔化学奖。
PCR技术(PCR ,Polymerase chain reaction)
PCR (Polymerase chain reaction) 是用一对寡聚DNA作为引物,通过加温变性-退火-DNA合成这一周期的多次循环,使目的DNA片段得到扩增。由于这种扩增产物是以指数形式积累的,经25-30个循环后,扩增倍数可达106。Dr. Karry Mullis 1985年发明,获1993年度诺贝尔化学奖; (一)基本要素 1、Taq DNA聚合酶: 水生栖热菌(thermus aquaticus,Taq)的DNA聚合酶 ①5’→3’DNA聚合酶活性; ②无3’→
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