Cellpro赛普1250μL吸头盒

【资源】实验四 PCR扩增制备目的基因

1．目的 学会PCR操作的基本技术。 2．原理 是将待扩增的DNA模板加热变性，与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性，然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环，n次循环后DNA可被扩增（1+X）n倍。其中 3．器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，0.2ml PCR微量管，双面微量离心管架，PCR仪，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，水漂，恒温水浴。 4．试剂 5U/μl Taq DNA聚合酶，PCR缓冲液（10×，MgCl2 free），25mM

【资源】实验三 质粒DNA的酶切

缓冲液（50´储存液），10´加样缓冲液，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌）。 6．操作步骤 （1)混合下列溶液于一个无菌的1.5ml微量离心管中： Pinpoint™xa-3 DNA (或pUCm-T-CHI ) 6 μl 10×酶切缓冲液（用EcoRV的缓冲液） 2 μl ddH2O 30 μl EcoRV 1μl BamHI 1μl 总体积 40μl （2）先准备一个冰盒并放入一定量的冰块。从-20℃冰柜中取出限制性内切酶，立即插入冰块中

重组腺病毒构建、扩增及纯化

收集病毒。按步骤1收集细胞并准备病毒上清。通过Western blot和/或PCR鉴定重组腺病毒产生。 4、PCR鉴定重组病毒。取5μl病毒上清加入10μl蛋白酶K，55℃孵育1hr,再煮沸5min，离心后取1-2μl作PCR。 五、重组病毒扩增，纯化 1、75cm2方瓶中接种293细胞，至密度达到90%,加入适量病毒上清感染细胞。3-4d后，细胞几乎变圆，且有一半细胞漂浮，则收集所有细胞。约500g转速离心，弃上清。 2、以灭菌PBS重悬沉淀，反复冻融4次。4℃下7000g离心5min