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- 2026年05月27日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pHIS1525
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pHIS1525巨大芽孢杆菌表达质粒
别称:pHIS1525
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 筛选标记: | Tet |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： |
质粒简介
pHIS1525巨大芽孢杆菌表达质粒人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4504/pCMV-SPORT6-KRTAP2-3人源基因质粒 |
| P4505/pCMV-SPORT6-ARF1人源基因质粒 |
| P4506/pCMV-SPORT6-SFN人源基因质粒 |
| P4507/pCMV-SPORT6-PRELID2人源基因质粒 |
| P4508/pCMV-SPORT6-HIST2H3C人源基因质粒 |
| P4509/pCMV-SPORT6-DDT人源基因质粒 |
| P4510/pCMV-SPORT6-DCAKD人源基因质粒 |
| P4511/pCMV-SPORT6-RNF138人源基因质粒 |
| P4512/pCMV-SPORT6-EDF1人源基因质粒 |
| P4513/pCMV-SPORT6-RPS21人源基因质粒 |
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文献和实验枯草芽孢杆菌，学名Bacillus subtilis，是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。与大肠杆菌不同，枯草芽孢杆菌没有外层膜，分泌的蛋白能直接释放到培养基中，是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。那么作为一种潜能巨大的原核表达系统，它究竟强在哪些方面呢？且让AtaGenix为您一一道来。 1 安全可靠 枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的，收录于FDA的GRAS菌中，欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。很多常用食品
也有发现。在动物组织中存在于线粒体、溶酶体中， Ca 可促进其作用，对热极为稳定，最适 pH偏碱性。猪胰脏里的磷脂酶已被提纯，一级结构也已确定。各种蛇毒中的磷脂酶也已被提纯，分子量为 8400到 3万左右，以各种同功酶存在。对于蛇毒磷脂酶 A2 来说，磷酯酰乙醇胺较卵磷酯难水解，它不能水解脑苷酯、神经磷脂。（ 2）磷脂酶 A1 EC、 3． 1， 1． 32，见之于脑、肝脏、胰脏等动物组织，大肠杆菌、巨大芽孢杆菌等细菌中。在动物组织中，存在于细胞膜，溶酶体、微粒体里，在大肠杆菌中主要分布于细胞
dCas9-VPR 分子量大，加上需要长期稳定表达，对某些细胞是负担。建议先构建 dCas9 稳定表达株，再递送 gRNA，而不是每次都共转两个大质粒。 坑 5：过表达质粒的"看不见"的问题 抗性筛选后的 pool 里，各细胞拷贝数差异巨大，表型是异质的； 随机整合可能破坏内源基因； 长期传代后外源启动子（尤其 CMV）可能被沉默； 没有内源 UTR 导致表达失控。 --- 三、按科学问题选择 1. 想验证"基因剂量增加是否导致表型"，且需要强表型 选过表达质粒。它的表达量高，容易拿到明确表型
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