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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
pDsRed-Monomer-N1
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pDsRed-Monomer-N1哺乳荧光质粒
别称: pDsRed-Monomer-N1
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞,荧光蛋白报告载体 |
| 质粒大小: | 4691bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导,瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主: | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途: | 蛋白表达 |
| 基因种属: | |
| 基因类型: | ORF |
| 原核抗性: | Kan |
| 真核抗性: | Neo/G418 |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
pDsRed-Monomer-N1 is a mammalian expression vector that encodes DsRed-Monomer (DsRed.M1), a monomeric mutant derived from the tetrameric Discosoma sp. red fuorescent protein DsRed. DsRed-Monomer contains forty-fve amino acid substitutions (listed on page 2). When DsRed-Monomer is expressed in mammalian cell cultures, red fuorescent cells can be detected by either fuorescence microscopy or fow cytometry 12–16 hr after transfection (DsRed-Monomer excitation and emission maxima = 557 nm and 592 nm, respectively). The DsRed-Monomer coding sequence is human codon-optimized for high expression in mammalian cells.

质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4691 bp ds-DNA circular SYN 22-10-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 6
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4691)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-10-22 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4691
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 591..671
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
CDS 679..1356
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Strongin et al., 2007)"
/note="DsRed-Monomer"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MDNTEDVIKEFMQFKVRMEGSVNGHYFEIEGEGEGKPYEGTQTAK
LQVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKAYVKHPADIPDYMKLSFPEGFTWERSMNFEDGGV
VEVQQDSSLQDGTFIYKVKFKGVNFPADGPVMQKKTAGWEPSTEKLYPQDGVLKGEISH
ALKLKDGGHYTCDFKTVYKAKKPVQLPGNHYVDSKLDITNHNEDYTVVEQYEHAEARHS
GSQ"
polyA_signal 1479..1600
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1607..2062)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2089..2193
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 2195..2552
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2403..2538
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2587..3381
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3613..3660
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpesvirus thymidine kinase polyadenylation signal"
rep_origin 3989..4577
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgcagt cgacggtacc gcgggcccgg
661 gatccaccgg tcgccaccat ggacaacacc gaggacgtca tcaaggagtt catgcagttc
721 aaggtgcgca tggagggctc cgtgaacggc cactacttcg agatcgaggg cgagggcgag
781 ggcaagccct acgagggcac ccagaccgcc aagctgcagg tgaccaaggg cggccccctg
841 cccttcgcct gggacatcct gtccccccag ttccagtacg gctccaaggc ctacgtgaag
901 caccccgccg acatccccga ctacatgaag ctgtccttcc ccgagggctt cacctgggag
961 cgctccatga acttcgagga cggcggcgtg gtggaggtgc agcaggactc ctccctgcag
1021 gacggcacct tcatctacaa ggtgaagttc aagggcgtga acttccccgc cgacggcccc
1081 gtaatgcaga agaagactgc cggctgggag ccctccaccg agaagctgta cccccaggac
1141 ggcgtgctga agggcgagat ctcccacgcc ctgaagctga aggacggcgg ccactacacc
1201 tgcgacttca agaccgtgta caaggccaag aagcccgtgc agctgcccgg caaccactac
1261 gtggactcca agctggacat caccaaccac aacgaggact acaccgtggt ggagcagtac
1321 gagcacgccg aggcccgcca ctccggctcc cagtagagcg gccgcgactc tagatcataa
1381 tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc
1441 tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt gcagcttata
1501 atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc
1561 attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta aggcgtaaat tgtaagcgtt
1621 aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt taaccaatag
1681 gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt
1741 gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg actccaacgt caaagggcga
1801 aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc aagttttttg
1861 gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg atttagagct
1921 tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa aggagcgggc
1981 gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc cgccgcgctt
2041 aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct
2101 atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga
2161 taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac cagctgtgga
2221 atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
2281 gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca
2341 gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc
2401 ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt
2461 tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga gctattccag aagtagtgag
2521 gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg atgaggatcg
2581 tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg
2641 ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg
2701 ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat
2761 gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca
2821 gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg
2881 gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat
2941 gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa
3001 catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg
3061 gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg
3121 cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg
3181 gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat
3241 caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac
3301 cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc
3361 cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc
3421 ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg
3481 gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt
3541 tcttcgccca ccctaggggg aggctaactg aaacacggaa ggagacaata ccggaaggaa
3601 cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca cggtgttggg tcgtttgttc
3661 ataaacgcgg ggttcggtcc cagggctggc actctgtcga taccccaccg agaccccatt
3721 ggggccaata cgcccgcgtt tcttcctttt ccccacccca ccccccaagt tcgggtgaag
3781 gcccagggct cgcagccaac gtcggggcgg caggccctgc catagcctca ggttactcat
3841 atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc
3901 tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag
3961 accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct
4021 gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac
4081 caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc
4141 tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg
4201 ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt
4261 tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt
4321 gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc
4381 tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca
4441 gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata
4501 gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg
4561 ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct
4621 ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta
4681 ccgccatgca t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P3263/pENTR223-COPE(2同义突变)人源基因质粒 |
| P3264/pENTR223-RIMS3(1点突变)人源基因质粒 |
| P3265/pENTR223-GPN3(1点突变)人源基因质粒 |
| P3266/pENTR223-DDRGK1人源基因质粒 |
| P3267/pENTR223-FSTL1人源基因质粒 |
| P3268/pENTR223-POLA2人源基因质粒 |
| P3269/pENTR223-DYNC1I1(1同义突变3点突变)人源基因质粒 |
| P3439/pENTR223-RHBDD1人源基因质粒 |
| P3440/pENTR223-PYCR1人源基因质粒 |
| P3441/pENTR223-VAPA人源基因质粒 |
| P3442/pENTR223-TAF9人源基因质粒 |
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验啦之类的那一块。这家伙是得了炸药奖的。Clontech公司构建了大量荧光定位质粒,如pEGFP-N1,pDsRed2-N1,pDsRed-Monomer-C1等等。 萤光,英文luminescence,即发光或称生物发光,是指萤火虫荧光素酶,海肾荧光素酶等在底物存在(实际上还需要ATP,氧,辅酶A等,这些试剂盒中已经加入)下发出的光,是生物化学反应,他的实质是酶,没有底物是不能发光的。把LUC利用的最好的是PROMEGA公司,他们有大量试剂盒是基于这两种荧光素酶的,最常见的是检测启动子或增强子活性
是由IRES序列行使功能的,但要注意的是,这部分的翻译水平比较低,比前面的MCSA大概低一个数量级。所以要选择好两个蛋白的各自位置。 3)、哺乳动物/真核荧光载体 pEGFP-N1 pEGFPN1 表达 绿色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白,目的基因位于N端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEGFP-N3 pEGFPN3 表达 绿色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白,目的基因位于N端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEGFP
?pDsRed2-N1(DsRed1-N-f)DsRed1-C-rpDsRed2-C1(DsRed1-N-f)DsRed1-C-rpDsRED2-C1(KAN+)pDsRED-ex-C1-FpEGFP-N-3’pDsRed-ExpressdsRed1_N_primer/CMV-FdsRed1_C_primer/CMV-RpDSRED-monomer-N1(KAN+)dsRed1_N_primer pDSRED-N1(KAN+)pEGFP-N-5’pDSRED-N-RpEASY-BluntM13FT7/ M13










