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卡梅德生物科技(天津)有限公司
CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务
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CRISPR/Cas9技术 | |
实验原理 | * 该技术的工作原理是:噬菌体等外源DNA入侵时,Cas蛋白复合物通常识别 3' 端含NGG的前间隔序列邻近基序 (PAM) 区域。然后,侵入的噬菌体或质粒释放的短DNA片段,插入宿主 CRISPR 位点中。在II型CRISPR系统中,CRISPR RNA(crRNA)通过碱基配对与转录激活crRNA(Trans-activating crRNA,tracrRNA)退火形成能够特异识别基因组序列的复合体,然后通过PAM(5’-NGG-3’)序列结合并侵入DNA,引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂(double-strand breaks,DSBs)。 这个识别复合体可以通过融合crRNA与tracrRNA序列形成sgRNA(single-guided RNA)进行简化。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力,但由于结构得到了简化,更方便研究者使用。通过电刺激转染的方法直接将Cas9蛋白和sgRNA复合物转染到细胞中,便能够对目的基因进行操作。 |
优点 | * 具有编辑效率高、构建简单、操作方便等优点 * 使用更加严苛的筛选标准,可以更有效地去除假阳性 * 能够成本低廉地实现有效灵活的基因敲除 * 具有广谱性,无基因、细胞及物种限制 * 可实现多个靶位点同时进行基因打靶 * 功能丰富,可实现敲除、插入、抑制、激活等多种目的基因 |
微生物 | 乳酸菌、沙门氏菌、大肠杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母、不动杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌,等 |
植物 | 大豆、小麦、烟草、苜蓿、玉米、棉花、甜瓜、西瓜、水稻、黄瓜、番茄、拟南芥、马铃薯,等 |
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