双荧光素酶报告|报告基因检测

双荧光素酶标记检测服务
      卡梅德生物（KMD Bioscience）多年来致力于免疫检测产品与技术研究，拥有完善的免疫检测技术、多种细胞学实验体系，卡梅德生物建立了完善的细胞培养平台，能够提供给客户多种细胞学基础实验，可以提供优质的免疫检测服务—双荧光素酶标记基因检测。我们拥有众多实验技术人员，积累了丰富的实验经验，对每一个实验步骤均有独到的研究和操作，能够凭借多年成熟技术水平，得到稳定有效的实验结果。卡梅德生物具备成熟的细胞生物学服务平台，能够提供包括免疫荧光，细胞凋亡检测，荧光原位杂交检测服务，细胞划痕实验，细胞流式检测等多种服务。我们可以根据客户的实际要求，能制定个性化实验方案供客户选择，节省宝贵的科研时间。
       卡梅德生物提供的双荧光素酶标记基因检测系统是一种基于萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase，FLUC）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase，RLUC）体内表达和催化的基因报告技术。荧光素酶是生物体内催化荧光素或脂肪醛氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。荧光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性荧光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的荧光素酶。荧光素酶催化荧光素氧化，在其氧化的过程中，会发出生物荧光，因此可通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认miRNA对靶基因的调控效果。双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。二者的催化底物和发光颜色不同，且光吸收波长不同，可在互不干扰的情况下进行检测，且在动物体内无内源性表达，使其在双报告实验中得到广泛应用。
       单报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响，卡梅德生物提供的双荧光素酶标记基因检测优势在于系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶。通过共转染的“对照”（海肾荧光素酶）作为内参为试验提供一基准线，经过归一化，可以尽可能地减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，保证实验数据的可信度。
       依托于我司建立的细胞生物学技术平台，我们可以提供优质的双荧光素酶标记基因检测服务，其优势在于系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶。通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线，经过归一化，可以尽可能地减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，使得实验数据更加可靠。我们也可以根据客户的实际要求，能制定个性化实验方案供客户选择，以节省您宝贵的科研时间。
免疫学检测服务 —  双荧光素酶标记基因检测：
 
 

项目	双荧光素酶标记基因检测
实验原理	* 该技术实验原理是：将目的基因3‘UTR区域或者lncRNA序列构建至载体中报告基因Luciferase的后面，构建荧光素酶质粒。然后转染至细胞中，通过比较过表达或者干扰miRNA后，检测报告基因表达的改变（以萤火虫荧光素酶为报告基因，以海肾荧光素酶为内参基因）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。结合定点突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点
应用	* 启动子与转录因子相互作用检测 * 潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测 * 潜在启动子/启动子核心区域检测 * 启动子区可能的转录因子结合位点检测 * 病毒/细胞相互作用 * 药物等化学诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强） * 射线等物理诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强） * miRNA-靶基因调控验证 * 竞争性内源RNA研究
优点	* 优越的灵敏度，高于Western blot 1000倍以上 * 内源性低，哺乳动物无内源性表达 * 荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响 * 发光检测，检测方便快捷 * 使用范围广，可检测细胞内任何分子

 

图1 构建载体与转染细胞：分别构建含有萤火虫（firefly）和海肾(renilla)荧光素酶基因载体，共转染细胞。收集细胞裂解液，加入两种酶相应的底物，根据荧光比例进行启动子表达水平定量分析。
双荧光素酶标记基因检测服务主要实验流程：
 
 
   


服务优势

• 经验丰富的实验操作水平和实验流程，具有可靠的统计学原理，每组实验重复三次；
• 丰富的实验经验，拥有资深的技术人员和服务部门，实验人员具有多年实验成功经验，能够确保实验数据真实可信，得到理想的实验结果；
• 拥有完善配套检测设备，进口的仪器试剂，可对结果进一步进行分析；
• 完整的信息分析，提供详细完整的双荧光素酶标记基因检测实验报告，包括实验数据，图片，结果分析等
• 具有成熟的细胞培养平台，能够为客户制定个性化实验方案，提供真正的一站式技术服务体验

服务项目




公司介绍：

卡梅德生物科技（天津）有限公司作为国家高新技术企业，专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选服务；同时，基于我公司成熟的五大核心技术服务平台，成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。

核心平台：

---噬菌体抗体展示技术平台

卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体（M13，T7噬菌体）展示技术平台，能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体（纳米抗体/驼类纳米抗体）制备方案，包括动物免疫，文库建立，文库筛选以及重组抗体的体外表达等。

 

---抗体工程技术平台

卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台，多克隆抗体制备服务平台，抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台：基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台，能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体，同时基于噬菌体展示技术，我司能够制备多物种的重组单克隆抗体，包括小鼠，兔子，骆驼，羊驼以及人单抗。

多克隆抗体制备服务平台：能够为客户提供兔多抗，羊多抗，骆驼类多抗，牛多抗等多物种的抗体制备服务，根据不同的抗原类型，来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案，以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。

抗体一级序列测序平台：为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求，我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务；同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。

抗体改造技术平台：卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备，抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体，均成功交付。

 

---蛋白表达与纯化服务技术平台

卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台，能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。

哺乳动物表达平台： 目前公司拥有Freestyle CHO，Expi CHO，CHO-DG44，HEK293F，Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则，全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂，以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系，相比市面常用蛋白表达载体，能够为客户提供更高纯度的蛋白。

昆虫细胞表达平台：目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9，配套使用的是来自Gibco的培养基，只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台，我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白，包括多种GPCR家族成员蛋白。

原核蛋白表达平台：大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达，一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备，针对每位客户的需求，我们的都会提供具体的方案设计。

酵母蛋白表达平台：毕赤酵母，酿酒酵母等蛋白表达体系，适用于需要真核表达蛋白，同时兼具产量与性价比的项目需求特点。

植物表达平台：为了提供更好的服务，卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务，项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度，高质量的植物来源的蛋白，已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。

---蛋白批量发酵平台

超高密度发酵技术：卡梅德生物科技能够为客户提供5L，10L,30L，80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务（微载体贴壁培养技术），人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml，适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵，能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台，我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。

同时，借助有氧发酵技术，我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务，采用有氧发酵类型的原核发酵技术，蛋白产量比传统的原核发酵要高（相差接近100倍蛋白产量和得率）。

---蛋白纯化技术平台：

我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪，同时拥有GE全套填料，包括Sphedax 75/200,500, G25,G100，CMFF,Q-FF，DEAE以及不同规格的预装柱等，能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业，硕士博士学历占比98%，因此有能力为客户提供快速，高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。

 

---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台

稳定细胞系构建平台：卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务，如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默，敲除，过表达等稳定细胞系；同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染（Lipofectin2000/3000）的稳定转染细胞系构建服务，如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。

卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆，蛋白定量，免疫印迹检测（SDS-PAGE、WB），宿主核酸检测，蛋白抗体亲和纯化，ELISA操作，内毒素检测，HPLC分析，免疫组化，IP，免疫浊度，流式细胞术等服务。