pGL3-Control哺乳报告质粒

基本信息
名称：pGL3-Control哺乳报告质粒
别称: pGL3.0-Control

启动子:	SV40
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	哺乳细胞，信号通路报告载体
质粒大小:	5256bp
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	哺乳细胞
诱导方式:	无须诱导，瞬时表达
5'测序引物:	RVP3:CTAGCAAAATAGGCTGTCCC
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	启动子检测
基因种属：
基因类型：	Promoter
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：	fLuc

质粒简介
 

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported File           5256 bp ds-DNA    circular SYN 23-3-2015
DEFINITION  .
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pGL3-Control
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5256)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2015-3-23 from MLCC
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5256
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        48..244
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 early promoter"
     rep_origin      95..230
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             280..1932
                     /codon_start=1
                     /gene="luc+"
                     /product="firefly luciferase"
                     /EC_number="
                     "
                     /note="luciferase"
                     /note="enhanced?luc+ version of the luciferase gene"
                     /protein_id="
                     "
                     /translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
                     HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
                     ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
                     MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
                     RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK
                     IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
                     GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
                     GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
                     LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
                     FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV"
     polyA_signal    1973..2094
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(2759..3347)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(3518..4378)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(4379..4483)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     rep_origin      4510..4965
                     /direction=RIGHT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     polyA_signal    5096..5144
                     /note="synthetic polyadenylation signal"
     misc_feature    5158..5249
                     /note="pause site"
                     /note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from 
                     the human?alpha-2 globin gene"
ORIGIN
        1 ggtaccgagc tcttacgcgt gctagcccgg gctcgagatc tgcgatctgc atctcaatta
       61 gtcagcaacc atagtcccgc ccctaactcc gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc
      121 cgcccattct ccgccccatc gctgactaat tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc
      181 ctcggcctct gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg
      241 caaaaagctt ggcattccgg tactgttggt aaagccacca tggaagacgc caaaaacata
      301 aagaaaggcc cggcgccatt ctatccgctg gaagatggaa ccgctggaga gcaactgcat
      361 aaggctatga agagatacgc cctggttcct ggaacaattg cttttacaga tgcacatatc
      421 gaggtggaca tcacttacgc tgagtacttc gaaatgtccg ttcggttggc agaagctatg
      481 aaacgatatg ggctgaatac aaatcacaga atcgtcgtat gcagtgaaaa ctctcttcaa
      541 ttctttatgc cggtgttggg cgcgttattt atcggagttg cagttgcgcc cgcgaacgac
      601 atttataatg aacgtgaatt gctcaacagt atgggcattt cgcagcctac cgtggtgttc
      661 gtttccaaaa aggggttgca aaaaattttg aacgtgcaaa aaaagctccc aatcatccaa
      721 aaaattatta tcatggattc taaaacggat taccagggat ttcagtcgat gtacacgttc
      781 gtcacatctc atctacctcc cggttttaat gaatacgatt ttgtgccaga gtccttcgat
      841 agggacaaga caattgcact gatcatgaac tcctctggat ctactggtct gcctaaaggt
      901 gtcgctctgc ctcatagaac tgcctgcgtg agattctcgc atgccagaga tcctattttt
      961 ggcaatcaaa tcattccgga tactgcgatt ttaagtgttg ttccattcca tcacggtttt
     1021 ggaatgttta ctacactcgg atatttgata tgtggatttc gagtcgtctt aatgtataga
     1081 tttgaagaag agctgtttct gaggagcctt caggattaca agattcaaag tgcgctgctg
     1141 gtgccaaccc tattctcctt cttcgccaaa agcactctga ttgacaaata cgatttatct
     1201 aatttacacg aaattgcttc tggtggcgct cccctctcta aggaagtcgg ggaagcggtt
     1261 gccaagaggt tccatctgcc aggtatcagg caaggatatg ggctcactga gactacatca
     1321 gctattctga ttacacccga gggggatgat aaaccgggcg cggtcggtaa agttgttcca
     1381 ttttttgaag cgaaggttgt ggatctggat accgggaaaa cgctgggcgt taatcaaaga
     1441 ggcgaactgt gtgtgagagg tcctatgatt atgtccggtt atgtaaacaa tccggaagcg
     1501 accaacgcct tgattgacaa ggatggatgg ctacattctg gagacatagc ttactgggac
     1561 gaagacgaac acttcttcat cgttgaccgc ctgaagtctc tgattaagta caaaggctat
     1621 caggtggctc ccgctgaatt ggaatccatc ttgctccaac accccaacat cttcgacgca
     1681 ggtgtcgcag gtcttcccga cgatgacgcc ggtgaacttc ccgccgccgt tgttgttttg
     1741 gagcacggaa agacgatgac ggaaaaagag atcgtggatt acgtcgccag tcaagtaaca
     1801 accgcgaaaa agttgcgcgg aggagttgtg tttgtggacg aagtaccgaa aggtcttacc
     1861 ggaaaactcg acgcaagaaa aatcagagag atcctcataa aggccaagaa gggcggaaag
     1921 atcgccgtgt aattctagag tcggggcggc cggccgcttc gagcagacat gataagatac
     1981 attgatgagt ttggacaaac cacaactaga atgcagtgaa aaaaatgctt tatttgtgaa
     2041 atttgtgatg ctattgcttt atttgtaacc attataagct gcaataaaca agttaacaac
     2101 aacaattgca ttcattttat gtttcaggtt cagggggagg tgtgggaggt tttttaaagc
     2161 aagtaaaacc tctacaaatg tggtaaaatc gataaggatc tgaacgatgg agcggagaat
     2221 gggcggaact gggcggagtt aggggcggga tgggcggagt taggggcggg actatggttg
     2281 ctgactaatt gagatgcatg ctttgcatac ttctgcctgc tggggagcct ggggactttc
     2341 cacacctggt tgctgactaa ttgagatgca tgctttgcat acttctgcct gctggggagc
     2401 ctggggactt tccacaccct aactgacaca cattccacag cggatccgtc gaccgatgcc
     2461 cttgagagcc ttcaacccag tcagctcctt ccggtgggcg cggggcatga ctatcgtcgc
     2521 cgcacttatg actgtcttct ttatcatgca actcgtagga caggtgccgg cagcgctctt
     2581 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag
     2641 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
     2701 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
     2761 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
     2821 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
     2881 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
     2941 tggcgctttc tcaatgctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
     3001 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
     3061 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
     3121 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
     3181 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
     3241 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
     3301 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga
     3361 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
     3421 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat
     3481 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg
     3541 cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt
     3601 agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag
     3661 acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc
     3721 gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag
     3781 ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca
     3841 tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa
     3901 ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga
     3961 tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata
     4021 attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca
     4081 agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg
     4141 ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg
     4201 ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg
     4261 cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag
     4321 gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac
     4381 tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca
     4441 tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag
     4501 tgccacctga cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca
     4561 gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct
     4621 ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt
     4681 tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac
     4741 gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct
     4801 ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt
     4861 ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac
     4921 aaaaatttaa cgcgaatttt aacaaaatat taacgtttac aatttcccat tcgccattca
     4981 ggctgcgcaa ctgttgggaa gggcgatcgg tgcgggcctc ttcgctatta cgccagccca
     5041 agctaccatg ataagtaagt aatattaagg tacgggaggt acttggagcg gccgcaataa
     5101 aatatcttta ttttcattac atctgtgtgt tggttttttg tgtgaatcga tagtactaac
     5161 atacgctctc catcaaaaca aaacgaaaca aaacaaacta gcaaaatagg ctgtccccag
     5221 tgcaagtgca ggtgccagaa catttctcta tcgata
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2969/pENTR223-CYP39A1(2点突变）人源基因质粒

P2970/pENTR223-THUMPD3（3同义突变）人源基因质粒

P2971/pENTR223-GRB7人源基因质粒

P2972/pENTR223-DIDO1（5287-6723bp点突变）人源基因质粒

P2973/pENTR223-PLTP(2点突变）人源基因质粒

P2974/pENTR223-ABAT(2点突变2同义突变）人源基因质粒

P2975/pENTR223-SLC18A1(2点突变）人源基因质粒

P2976/pENTR223-RTN4R人源基因质粒

P2977/pENTR223-HTR3A(19-1455bp1点突变1同义突变）人源基因质粒

P2978/pENTR223-IFNGR1人源基因质粒

P2979/pENTR223-ALG10人源基因质粒

P2980/pENTR223-OSBPL2人源基因质粒