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- Xybio
- 上海
- P0190
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
TopFlash
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：TopFlash哺乳报告质粒
别称: TopFlash
质粒属性
质粒简介
Wnt / Wg家族编码涉及细胞生长调节，细胞命运的分泌糖蛋白测定，器官发生和肿瘤发生。 从无翼（wg）信号的遗传分析推断果蝇，在哺乳动物细胞中，Wnts通过卷曲家族的受体信号传递到Dishevell。降低糖原合成酶激酶-3（GSK-3）活性。这导致稳定和积累胞质 - 连环素，一种GSK-3底物，当被GSK-3磷酸化时，被靶向于泛素介导的蛋白水解.- 连环素然后转移到细胞核，其中与Tcf / LEF家族成员的复合物转录调节因子激活Tcf反应基因的转录。该Tcf报告质粒，以及FOPFLASH能够在用这些构建体转染的细胞中定量Wnt / Wg信号。
质粒图谱
质粒序列
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：TopFlash哺乳报告质粒
别称: TopFlash
| 启动子: | TK |
|---|---|
| 复制子: | pUC ori |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳系列质粒；哺乳报告质粒；荧光素酶质粒 |
| 质粒大小: | 5539bp |
| 质粒标签: | Luc |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无需诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | M13F (TGTAAAACGACGGCCAGT ) |
| 3'测序引物: | M13R (CAGGAAACAGCTATGACC) |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 信号报告 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | Promoter |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | fLuc |
质粒简介
Wnt / Wg家族编码涉及细胞生长调节，细胞命运的分泌糖蛋白测定，器官发生和肿瘤发生。 从无翼（wg）信号的遗传分析推断果蝇，在哺乳动物细胞中，Wnts通过卷曲家族的受体信号传递到Dishevell。降低糖原合成酶激酶-3（GSK-3）活性。这导致稳定和积累胞质 - 连环素，一种GSK-3底物，当被GSK-3磷酸化时，被靶向于泛素介导的蛋白水解.- 连环素然后转移到细胞核，其中与Tcf / LEF家族成员的复合物转录调节因子激活Tcf反应基因的转录。该Tcf报告质粒，以及FOPFLASH能够在用这些构建体转染的细胞中定量Wnt / Wg信号。
质粒图谱
质粒序列
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2817/pENTR223-MLC1-C74A人源基因质粒 |
| P2818/pENTR223-GNAZ-C404A人源基因质粒 |
| P2819/pENTR223-FGD6人源基因质粒 |
| P2820/pENTR223-IQUB（1-1119bp）人源基因质粒 |
| P2821/pENTR223-PTPN2-C15G人源基因质粒 |
| P2822/pENTR223-NFKBIE（418-1503bp）人源基因质粒 |
| P2823/pENTR223-DNAJB11人源基因质粒 |
| P2824/pENTR223-B4GALT3（2同义突变）人源基因质粒 |
| P2825/pENTR223-KCNJ13（3点突变）人源基因质粒 |
| P2848/pENTR223-NGEF人源基因质粒 |
| P1600/pENTR-GFP-MDC1 (770-7)人源基因质粒 |
| P1337/R777-E011 Hs.ARHGAP35人源基因质粒 |
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