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- 免疫荧光（石蜡-单标）
- 全国
- 2026年01月04日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
晶莱生物
- 服务名称：
免疫荧光（石蜡-单标）
- 规格：
切片
实验意义
1.免疫荧光技术特异性强、敏感性高、反应速度快、结果清晰明确，在临床检验和科学研究工作上有很高的应用价值。
2.操作简便，便于推广。
实验步骤
1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
2.抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8min停火8min转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定)。
3.画圈：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走)。
4.血清封闭:在圈内滴加BSA孵育30min（一抗若是山羊来源，则加兔血清）。
5.加第一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
6.加二抗：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属标记的按一定比例配好的二抗覆盖组织，室温孵育50min。
7.DAPI复染细胞核：切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
8.自发荧光淬灭：切片稍甩干后，在圈内加入自发荧光淬灭剂5min，流水冲洗10min。
9.封片：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
10.镜检拍照：切片置于扫描仪下采集图像或荧光显微镜下拍照。(DAPI紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光;FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光;CY3激发波长510-560，发射波长590nm，发红光. CY5激发波长 608-648nm, 发射波长672-712。 DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光，绿光 。
结果展示
实验完成周期及交付标准
1. 实验周期：1-2周
2. 交付标准：蜡块、切片、荧光图片、半定量分析、实验报告（实验步骤、试剂、仪器等）
需确认的信息
1.是做石蜡切片还是冰冻切片（推荐做石蜡切片）
2. 样本的种属和类型，是组织还是细胞？
3. 样本的数量
4. 是否提供一抗，我方可代购
5. 半定量分析要求
6. 拍照要求
文献参考
[1] Cohen M , Varki N M , Jankowski M D , et al. Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution[J]. Journal of Visualized Experiments Jove, 2012, 67(67):e3928-e3928.
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文献和实验免疫荧光实验步骤 脱蜡至水 二甲苯Ⅰ(8min) 二甲苯Ⅱ(8min) 无水乙醇和二甲苯1:1(5min) 无水乙醇(3min) 95%乙醇(3min) 85%乙醇(3min) 75%乙醇(3min) PBS洗3遍 二．抗原修复 柠檬酸钠抗原修复液修复。 抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。 三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。 四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧
免疫荧光单标记和双标记的方法 1免疫荧光单标记方法 免疫 荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。 1)所需材料与试剂 (1)培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60％一70％的细胞。 (2)一抗、FITC或TRITC标记的二抗。 (3)4％多聚甲醛固定液或冷
背景： 因实验需要，于2008年07月04日初次做肝脏组织ZO-1（一种胞膜蛋白，紧密连接蛋白）免疫荧光染色，以前我对酶免疫组化非常熟悉，在园子内也有不少置顶贴和精华帖，但免疫荧光一直还没做过（原理知道，但细节不太了解）。我先用石蜡切片做了5次，结果一直不理想（表现为未见特异性强染色）；近几日，我又切了冰冻切片，做了2次，终于基本成功了。在这个过程中，我对免疫荧光染色技术有了全新的认识，而前些天发出免疫荧光求助贴，回复的很少，所以有必要加强对免疫荧光方面的讨论），不妥之处敬请指正。有人会
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