免疫荧光（冰冻-单标）

免疫荧光 
免疫荧光技术又称为荧光抗体技术，将荧光标记技术和免疫学方法结合起来，利用抗原抗体相互作用从而对组织或细胞内的抗原或抗体物质进行定位、示踪、定性以及相对定量等。

实验意义  
1.免疫荧光技术特异性强、敏感性高、反应速度快、结果清晰明确，在临床检验和科学研究工作上有很高的应用价值。
2.操作简便，便于推广。

实验步骤  
1.石蜡切片免疫荧光：
①烘箱内进行烘片，然后将切片进行常规脱蜡至水；
②抗原修复：使用水浴锅或电炉煮沸热修复，或者中档微波修复，缓冲液为0.01M柠檬酸钠缓冲液（pH6.0）；
③去除内源性酶：3%H2O2室温孵育10 min阻断内源性过氧化物酶的活性后，PBS清洗3次×3 min；
④封闭：5~10%正常血清封闭30 min；
⑤一抗孵育：稀释好的一抗4℃孵育过夜，PBS清洗3次×3 min；
⑥二抗孵育：将稀释好的带荧光标记的二抗，摇床缓慢孵育1 h，PBS清洗3次×3 min；
⑦DAPI复染核，PBS清洗3次×3 min；
⑧封片：Mounting Medium封片，凝固后拍照。（多重荧光染色：可使用绿色荧光、红色荧光和蓝色荧光进行三重荧光染色）。

2. 冰冻切片免疫荧光：
①新鲜组织经处理后，立即在恒冷冰冻切片机内切片，厚度为5~6 μm；
②防脱玻片，贴片，室温阴干约12 h；
③4℃纯丙.酮10 min处理，风干；
④PBS漂洗3次×10 min；
⑤0.3%Trion-100溶液37℃3次×10min；
④PBS漂洗3次×5 min；
⑥去除内源性酶；
⑦封闭、一抗孵育、二抗孵育、复染核、封片等与石蜡切片的处理类似，同样也可做多重荧光染色。

结果展示  



实验完成周期及交付标准 
1. 实验周期：1-2周
2. 交付标准：蜡块、切片、荧光图片、半定量分析、实验报告（实验步骤、试剂、仪器等）

需确认的信息 
1.是做石蜡切片还是冰冻切片（推荐做石蜡切片）
2. 样本的种属和类型，是组织还是细胞？
3. 样本的数量
4. 是否提供一抗，我方可代购
5. 半定量分析要求
6. 拍照要求

文献参考  
[1] Cohen M , Varki N M , Jankowski M D , et al. Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution[J]. Journal of Visualized Experiments Jove, 2012, 67(67):e3928-e3928.
 

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