Netrin-1通过Unc5b-MAPK轴诱导B-ALL细胞的抗凋亡和促生存效应

背景：B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）占所有急性淋巴细胞白血病（ALL）病例的85%以上，是最常见的儿童恶性肿瘤。尽管B-ALL患者的5年总生存率超过90%，但复发或难治性B-ALL患者可能预后不良并发生不良事件。轴突导向因子netrin-1已被报道参与多种癌症的肿瘤发生。然而，netrin-1对B-ALL的影响仍不清楚。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测B-ALL患儿和无非肿瘤性疾病患儿外周血样本中netrin-1的表达水平。然后，采用CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术检测用浓度为0、25、50和100 ng/ml的外源性重组netrin-1处理的B-ALL细胞（Reh和Sup B15）的活力和凋亡。此外，采用免疫共沉淀（co-IP）检测netrin-1的受体。用重组慢病毒在B-ALL细胞中诱导UNC5B表达干扰，然后进行CCK-8实验、流式细胞术和western blotting实验，以验证netrin-1可能通过受体Unc5b作用于B-ALL细胞。最后，应用western blotting和激酶抑制剂处理检测下游信号通路。结果：netrin-1在B-ALL中表达升高，且在高危和中危分层组患者中netrin-1表达上调。然后，我们发现netrin-1诱导B-ALL细胞的抗凋亡效应，提示netrin-1在B-ALL中发挥致癌作用。co-IP结果显示netrin-1与B-ALL细胞中的受体Unc5b相互作用。在B-ALL细胞中干扰UNC5B可消除netrin-1的抗凋亡作用。进一步的western blotting检测重组netrin-1处理的B-ALL细胞中常见信号转导通路关键分子的磷酸化水平，发现FAK-MAPK信号通路被激活。UNC5B干扰可消除netrin-1的抗凋亡效应和FAK-MAPK磷酸化。应用FAK抑制剂和ERK抑制剂处理，验证了FAK-MAPK通路可能是Unc5b的下游。结论：综上所述，我们的研究结果表明netrin-1通过结合受体Unc5b激活FAK-MAPK信号通路，诱导B-ALL细胞的抗凋亡效应。