小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)培养的发展简史

       1973年---加拿大籍科学家Raplph M. Steinman在美国洛克菲勒大学(RockefellerUniversity)工作时从小鼠外周淋巴器官(脾、淋巴结和派氏集合淋巴结)中首次鉴定出树突状细胞(Dendritic Cells, DC)[1]。Steinman也因此获得了2011年诺贝尔生理学或医学奖。

       1992年---日本京都大学(Kyoto University)的Inaba在添加GM-CSF(粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子)的情况下，分别成功从小鼠血液和骨髓细胞体外诱导出大量的DC[2,3]。因此，Inaba被认为是小鼠DC体外培养的创立者，且Inaba法被称为小鼠BMDC培养的经典方法。

1. 这些工作均是在Ralph M. Steinman的参与下完成的；

2. Inaba培养的BMDC来源于小鼠股骨和胫骨中的骨髓；

3. Inaba先用抗体+补体法去除骨髓中的淋巴细胞，以防淋巴细胞对BMDC培养的影响；

4. 在诱导分化过程中，为防止粒细胞的干扰，Inaba通过每2天轻摇培养板并3/4体积换液的方法来尽量去除粒细胞；

5. Inaba证实单用GM-CSF通过6-8天的培养，即可从骨髓细胞诱导得到大量的DC细胞，而且混合淋巴细胞反应提示其为成熟的DC细胞；

6. 该法可从一个小鼠的骨髓中培养获得 5-7 x 10⁶个DC细胞。

       1994年---奥地利因斯布鲁克大学(University of Innsbruck)的Romani等发现GM-CSF和IL-4(白细胞介素4)联合诱导，可从人血液PBMC(外周血单个核细胞)制备出大量的DC，而GM-CSF单独诱导的效果不好[4]。后来，科学家也将IL-4应用于小鼠BMDC的培养[5,6]。

       1999年----德国明斯特大学(University of Munster)的Labeur研究表明，单独用GM-CSF诱导的BMDC为未成熟DC(immatureDC, iDC)，GM-CSF和IL-4联合诱导出来的BMDC的成熟度居中，添加CD40L或LPS可进一步诱导DC完全成熟，即成熟DC(mature DC,mDC)[7]。

       1999年---德国埃尔朗根大学(University of Erlangen)的Lutz开发出一种可获得超大量BMDC的方法，每只小鼠可获得的BMDC的数量是Inaba经典方法的50倍之多，达1-3 x 10⁸个DC细胞/小鼠[8]。该法被DC研究者广泛认可和使用。

1. 骨髓不作任何预先处理；

2. 使用细菌培养皿(Petri Dish)替代细胞培养板；

3. 细胞的初始铺板密度低，为2x10⁵/ml；

4. 培养时间延长至10-12天；

5. 仍仅用GM-CSF诱导，但第8天或第10天后减量使用；

6. 第6天和第8天半量换液，但吸出的悬浮细胞离心后放回原板。

       2002年---美国匹兹堡癌症研究院大学(University of Pittsburgh Cancer Institute (UPCI)) 的Son也研发出一种超大量BMDC培养方法，称为bulk-culture method。该法每只小鼠可获得的BMDC的数量是Inaba经典方法的7-10倍，即3–4 x 10⁷个BMDC，而且培养时间与Inaba经典方法相似，仅需7天[9]。

1. 骨髓取出后仅溶血，不做任何其它处理；

2. 使用6孔培养板培养；

3. 培养过程中使用GM-CSF+IL-4联合诱导；

4. 培养的第4天和第7天补加足量的GM-CSF和IL-4。

       另外，我们还备有实用的BMDC培养操作手册 (内部交流，非商用)，因文件比较大，若需要，可以联系电话：17714680518 (微信同号)向我们索取发送。