小鼠脾脏T细胞的扩增方案

小鼠脾脏T细胞的扩增方案
1.用PBS稀释配置anti-CD3功能性抗体并铺板,浓度为1-5ug/ml。根据需要选择并计算所需抗体的量。以96孔板为例，每孔加入50μl(6孔板500μl)。37°℃ 2h或者4°C过夜 (过夜包被效果比较好)。
2.加入细胞前吸去孔内抗体溶液，加入200ul(6孔板2ml)PBS洗涤2次，去除未结合抗体。
3.研磨小鼠脾脏，PBS洗涤细胞1次,离心后的沉淀弹散,加入2ml红细胞裂解液(1X)(Cat#64010-00-100)，室温裂解5min，用完全培养基洗涤细胞一次;
注:推荐使用BioGems红细胞裂解液，裂解温和，对骨髓细胞损伤小!

4.用含有anti-CD28(1-2μg/ml)以及1L-2(10-50 ng/ml)的完全培养基重悬细胞,加入96孔板(或6孔板内)。(96孔板加入3*105细胞,6孔板加入5-8*106细胞)
5.培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态，培养3-5天即可见到细胞明显增殖。

以上CD3和CD28抗体的浓度，可根据自己的需求进行选择，如果培养时间短，希望有很强的活化作用可以适当提高浓度，反之，可降低浓度。虽然高浓度诱导活化能力强，但其诱导凋亡的作用也很明显。