人外周血来源T细胞扩增方案

人外周血来源T细胞扩增方案
1.用PBS稀释配置anti-CD3功能性抗体并铺板,浓度为1-5ug/ml。根据需要选择并计算所需抗体的量。以96孔板为例，每孔加入50ul(6孔板500ul了)。37°C2h或者4°C过夜(过夜包被效果比较好)。
2.加入细胞前吸去孔内抗体溶液，加入200ul(6孔板2ml)PBS洗涤2次，去除未结合抗体。
3.取外周血PBMC(步骤省略)，也可用分选的T淋巴细胞(也可选择在细胞刺激增殖后进行分选)。
4.PBS洗涤细胞1次,用含有anti-CD28(1-2ug/ml)以及IL-2(10-50ng/ml)的完全培养基重悬细胞,加入96孔板(或6孔板内)。(96孔板加入3*105细胞，6孔板加入5-8*105细胞)。
5.培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态,培养3-5天,即可见到细胞明显增殖。

培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态,培养3-5天,即可见到细胞明显增殖。