细胞培养大全

流式细胞术应用广泛，是免疫表型及功能分析的常见实验方法。而获得高质量的单细胞悬液是流式实验成功的关键因素。本为以小鼠结肠固有层免疫细胞分离为例，对单细胞悬液的获取方法进行简述。

参考无血清培养法去除雪旺细胞培养中成纤维细胞污染的方法，结合目前已有的肠肌间神经丛神经胶质细胞原代分离、培养法的报道，我们对小鼠结肠胶质细胞进行分离培养，获得了纯度较高且活性良好的结肠肌间神经丛肠胶质细胞。

直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步，是从事培养工作的人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同分为组织块培养法和单层细胞培养法。

细胞生长至对数中晚期，以培养基制备高浓度细胞悬液，加入细胞保护剂，等份转移至冻存管中，缓慢冷冻。市场上有多家成熟的无血清冻存液，这些试剂简单实用，极其便捷。对一些难复苏的细胞极其友好。但是对于长期的细胞留库保种还是建议采用传统的方法。两种冻存液比较方法优点缺点传统 DMSO/甘油冻存法能较好的维持细胞的特性一些细胞冻存效果不佳无血清无蛋白冻存法使用方便，对新手友善同样含有 DMSO，某些敏感细胞慎

冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套，因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮，而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。

细胞培养是指将细胞从动物或植物体内取出，然后在适宜的人工环境中生长的过程。细胞可以在培养前直接从组织中取出并通过酶或机械方法进行解离，也可以来源于已建立的细胞系或细胞株。包括原代培养和传代培养。原代与细胞系培养比较类型优点缺点原代细胞培养非变异的、非永生化的细胞；具有更好的生理相关性，各方面更接近体内状态；具有一定的生命周期；培养周期长、不同批次细胞差异大、培养原代细胞花费更高细胞系培养相对便宜，

细胞传代培养不仅是一种将细胞种保存下去的方法，而且也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。

1. 将含有冻存 HeLa S3 细胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解冻。2. 用 70% 乙醇对安瓿的顶端进行消毒，打开安瓿，用吸管将细胞转移到含有 5 ml 完全 MEM-10 培养基的 25 cm2 组织培养瓶中，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布于培养瓶中，放入 5% CO2 加湿培养箱中 37℃ 培养过夜。3. 将培养基吸出，用 0.5 ml 37℃ 的胰酶/EDTA 覆盖细胞，消化 30～40

在动物细胞培养过程中，必须有可以贴附的支持物表面，其依靠自身分泌或培养基中的贴附因子才能在该表面生长增殖的离体动物的培养细胞。由于血清具有终止胰蛋白酶消化，提供细胞生长所需的贴壁因子、免疫球蛋白、胰岛素等其它营养成分及细胞因子，因此成为体外细胞培养液中的常用添加成分，其对细胞的培养意义重大。

细胞培养是模拟机体内生理条件，将细胞从机体内取出，在人工条件下培养，使细胞生存、生长、繁殖和传代，从而可以进行细胞生命过程、细胞癌变等问题的研究。

细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，该方法能排除神经体液因素的影响及肝、肾解毒功能的干扰，观察某些因素或药物对培养细胞的直接作用。