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        冻存细胞的复苏

        相关实验:冻存细胞的复苏

        最新修订时间:

        原理

        冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套,因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮,而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1) 调整水龙头温度为 40°C,在龙头下放置一广口烧杯。

        2) 从液氮中取出冻存细胞的冻存管。

        3) 将冻存管置于 40°C 流水中直至完全融化,一旦冰块消失即将冻存管从水浴中取出。

        该步骤的目的是尽可能快地融化细胞,但不允许细胞温度升到 37°C 以上而且一旦其融化细胞便不应再保存在冻存液中。

        4) 用 70% 乙醇擦洗冻存管外部以降低污染机会。

        5) 吸取冻存管内容物于 T-25 细胞培养瓶或培养皿中,缓慢加人 4 ml 生长培养液,并混匀。

        6)37°C 孵育细胞,在 24 小时内更换培养液以滋养细胞。

        注意事项

        • 某些类型细胞呈现较好的复苏效果,如果缓慢加入培养液于冻存液中以使冻存液被去除,然后细胞离心后重悬于新鲜培养液中。

        • 冻存记录:保存冻存细胞的精确记录是很重要的。需建立细胞生长史、名称、传代次数、冻存日期、复苏次数、生长培养液和在冻存器中的位置都是应记录的项目。

        • 冻存液:应用补充 10%~20%FBS 的生长培养液和 10% 甘油或 DMSO。大多数悬浮细胞釆用 DMSO。最佳冻存液配方在比较 FBS 浓度(10%~20%),DMSO(5%~20%) 或甘油(10%~15%) 浓度后决定。在低温状态保存数天后进行复苏效率的比较。

        小心:甘油;DMSO

        常见问题

        将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存。

        来源《细胞实验指南(上册)》作者:黄培堂。

        来源:丁香实验

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