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蛋白表达与分析
蛋白表达与分析
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问
蛋白表达~求助
SnowQuiet
可以将保存菌种活化后，再进行转接摇菌提取蛋白步骤，活性会高一些。
2 回答
412 围观
问
蛋白表达不出来
bamboopiggy
先提一下质粒送测序，确定你的质粒还在
5 回答
543 围观
问
蛋白质不表达，蛋白表达量低的原因？
迟C迟
蛋白不表达就说明他的转录和翻译，这个过程出现了问题。表达量低说明他这个合成蛋白质的效率是很低的，可能在盘旋折叠最后一个部分出现了问题。
3 回答
3528 围观
问
为什么 IPTG 诱导蛋白表达时没有目的蛋白表达？
我是金博士
这种情况就比较背。一个是可以调整IPTG浓度再试试。要么就是再换个重组子。测序对，不表达，这种情况也蛮多的。
1 回答
3041 围观
问
想请问一下大家，检测磷酸化蛋白表达量变化的WB实验，除了加磷酸酶抑制剂之外，怎么操作可以让磷酸化蛋白更好跑出来呢？
Kimser
因为磷酸化是个可逆过程，所以除了磷酸酶抑制剂，还需要跟时间赛跑，新鲜和短时间流畅的操作会减少磷酸化的变化。当然，抑制剂仍然是关键所在，不过要注意对不同蛋白，磷酸酶抑制剂也不同。
3 回答
1093 围观
问
最近做信号通路，为啥上游的蛋白表达降低，下游蛋白表达升高？
balalaLy
上下游蛋白已知的调控关系是促进还是抑制？如果是抑制关系那就是正常，如果是促进，那你可能需要做一下不同的时间点，或者下游蛋白的活化状态。
2 回答
1959 围观
问
重组蛋白表达的目的蛋白分子量小于预测的原因？
dxy_e0cuvey7
呜呜呜 有没有找到原因和解决办法呀呀？我的也一样少了10kd
28 回答
7424 围观
问
蛋白表达量不高是什么原因？
Topmicro
蛋白表达量不高的原因有很多，比如表达用载体是否合理？培养液是否需要优化？
6 回答
605 围观
问
请教蛋白表达时如何使用溶菌酶
冷泉港蛋白
科研一般用超声裂解，比溶菌酶效果好。1.超声300W,超声3秒，停3秒，10分钟。应该会清亮了。2.每克菌体加20ml-50ml PBS3.变幅杆好像是选6号的吧
3 回答
701 围观
问
microRNA过表达后与靶蛋白表达升高？
bamboopiggy
一般加入microRNA 的mimics以后，蛋白是会降低的。你先确保你wb的实验没问题，内参齐。然后另外找个公司再合成一个mimics试试，可能是mimics的合成有问题
3 回答
814 围观
问
本人纯化his标签蛋白，无论如何更换表达感受态和诱导条件，蛋白表达量都很低是什么原因？使用载体为32a，和28a都不理想
天一湖医者
a可能原因：超声功率不合适(太大，蛋白碳化，太小，蛋白没完全释放)解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。b.样品或缓冲液不合适解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。c.His标签暴露不完全解决方法：在缓冲液中加变性剂(4-8M尿素，4-6M盐酸胍)，然后用IMAC介质纯化。d.His标签丢失解决方法：必要时增加His的个数并确保正确表达，同时降低上样速度，确保足够的孵育时间
2 回答
918 围观
问
IPTG诱导蛋白蛋白表达不出来
府宅
建议可以尝试改用酵母或者昆虫细胞表达。甚至直接用哺乳细胞表达。如果一定要用BL21表达，我的建议是尝试用较低浓度IPTG在较低温度比如室温下表达更长时间，温和的表达条件运气好的话能稍微让蛋白质没那么容易misfold，不过不要抱太大希望。如果还是表达不出来，截短蛋白到70kDa左右。专注于一部分蛋白
2 回答
3328 围观
问
本人最近在做蛋白表达，蛋白表达在包涵体，用的是8M尿素进行溶解，但是溶解的总是不完全！这是为什么呢？
lyang556
可以尝一下以下方法：1. 提高pH值，比如pH10或以上；2. 添加高浓度还原剂如DTT等；3. 提高溶解的温度；4. 借助其他物理方法如超声波等。
3 回答
1377 围观
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