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克隆与构建
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问
质粒构建中，pcDNA3.1(+)上，插入两个蛋白，选用什么启动子？各启动子会有干扰吗？
灵枢天问
CMV吧，如果是两个启动子合负责一个片段，那只要插入位点合适，没有其他干扰
4 回答
562 围观
问
质粒构建过程中DNA扩增的问题？
汤姆卜丽波
退火温度可以做个梯度，找到最合适的
4 回答
473 围观
问
构建载体一直构建不上，可咋整？
天一湖医者
1.确保克隆到的基因完全正确：如果这一步出问题，无非两点原因：引物设计不合理，模板质量不高。解决方法：多找几个模板同时进行克隆；重新评估引物的合理性和特异性，比如将引物长度增至40 bp左右。2.关于酶切酶切其实要求并不十分严格，正常操作下，不论电泳检测是否十分清楚，酶切产物足够连接用量了，没必要纠结。
3 回答
1178 围观
问
做平板克隆形成使用，最后要计算克隆数和细胞数的比值，怎么确保铺板细胞数一致或者确认铺板的细胞数呢？用细胞自动计数仪误差也很大啊！
bamboopiggy
一般要做三个复孔，用细胞计数仪时，原始细胞的浓度，最好控制在一个数量级。
3 回答
958 围观
问
细胞分选单克隆之后一般多少天能长起来呀？
丁香粉猪猪
干细胞填充后，通常需要3-4周开始增生，3个月左右达到最佳效果。
3 回答
854 围观
问
如果是做多克隆抗体，是免疫兔子好还是免疫老鼠好呢？如果是免疫老鼠，对小白鼠的品种有要求吗？
郭郭的郭郭
多克隆抗体一般通过免疫接种合适的哺乳类动物而产生，例如小鼠、兔子或者山羊。通常更倾向于采用大型哺乳类动物，因为可以采集更多的血清。一般选择兔子比较多，如果是老鼠的话，对种类一般没有要求。
2 回答
1117 围观
问
菌液活化过程中，大肠杆菌在加了氨苄的固体LB上可以长出单克隆，但是将单克隆挑取到液体培养基上怎么都长不出来，可能是什么原因呢？
申东熙老伯
注意一下是不是氨苄的平板出现了卫星菌落，这样挑的菌抗性丢失，在液体培养基菌长不起来。
4 回答
2002 围观
问
挑取单克隆时重组单克隆有没有一定的特点，和空质粒不一样的那种
Eason老歌迷
单克隆筛选是根据细胞所具有的特性将单个细胞从混合的细胞样品中分离出来的⼀种技术，是抗体制备细胞株优化、稳转细胞株构建、药物靶点筛选等应⽤中重要的⼀环。具有以下特点:通用性筛选：适用于多种细胞，无需携带抗性荧光标签。单列线性模式：适用于高价值细胞。提供克隆性证据：可为每个克隆提供克隆形成图像。温和的微流控技术：更高存活率，更低损失率。
6 回答
398 围观
问
请问克隆引物和qPCR引物有什么区别，可以用qPCR引物做基因克隆用吗？
bamboopiggy
看你的实验目的，克隆的引物一般是在基因的起始和结尾设计，但是qPCR的引物的产物一般是50-200bp左右的，如果你要克隆50-200bp左右的片段，就可以用qPCR的引物。
3 回答
1761 围观
问
分子克隆实验中出现很少或者没有转化子的原因是什么？
迟C迟
考虑以下几个原因：1、抗生素有没有用错，检查载体抗性。2、转化过程是否成功，电激转化还是化学转化，转化条件是否正确。3、感受态细胞是否可用，有没有低温保存，是否在操作过程中失活，实在不行建议买商业化感受态细胞。
4 回答
2666 围观
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