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qPCR 问题全解析
qPCR 问题全解析
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问
各位大神，想问一下qPCR扩增曲线中为什么会有弧形的曲线?怎么解决？
今晚月色真美_
模板浓度过高，预变形时间不足，引物不特异等等原因。你调整下上述因素重新扩增试试
5 回答
717 围观
问
qPCR处理组和对照组内参基因表达差异太大是否影响结果？
天一湖医者
qPCR处理组和对照组内参基因表达差异太大会影响结果。
3 回答
3020 围观
问
qPCR实验中Ct值是什么意思？有什么作用？怎么看？
天一湖医者
阈值循环数 Threshold cycle (Ct) 也写作Cq值，荧光信号大于荧光阈值时PCR循环数。仪器软件通常将第3-15个循环的荧光值设为基线（baseline），是由于测量的偶然误差引起的。阈值（threshold）一般是基线的标准偏差的10倍。在实际操作中也可以手动调节。高于阈值的荧光信号被认为是真实的信号，用于定义Ct值。Ct会受到阈值的影响，每次试验由于样品和仪器的不同会导致基线不
3 回答
2079 围观
问
请问，做qPCR实验，提取样品的RNA达到怎样的标准（如OD值，260/280），才比较符合做qPCR的实验的质量？
汤姆卜丽波
浓度要高一点，至少100+，然后260/280在2.0左右比较纯
3 回答
2946 围观
问
跑qPCR，内参基因和目的基因CT值正常，结果也比较理想，但内参基因熔解曲线呈较宽的单峰，Tm比目的基因熔解曲线低很多，有效吗？
bamboopiggy
看图，感觉两个melt curve 底边是一样宽的，但是你如果觉得内参基因的宽，可以考虑换一个大家常用的内参基因试试，一般情况，内参基因不会出现这种问题。
3 回答
829 围观
问
做qPCR必须每次要做三个生物学重复和三个技术重复吗
balalaLy
技术重复是同样的sample在一次pcr实验中重复三个复孔，你加样熟练的话也可以只做2个复孔。三次生物学重复是收三批sample
4 回答
2287 围观
问
qPCR实验中，目标基因没有起峰，其他的两个基因数据正常，可以确定是引物设计问题吗？
bamboopiggy
大概率是引物的问题，如果全部都没有起峰的话。
5 回答
386 围观
问
求助各位大神，帮我看看qpcr扩增曲线太奇怪了，有负的荧光信号，但是溶解曲线是好的，
Eason老歌迷
你这是有溶解曲线，无扩增曲线。可能是反应程序问题，扩增阶段未收集荧光信号。建议你检查程序设置。
3 回答
345 围观
问
QPCR实验平行孔Ct值差别太大是什么原因？要怎样进行调整？平行孔之间Ct值要保证偏差在多少之间才可以，有标准么？
Eason老歌迷
ct值差别大，可能是模板浓度低或存在PCR抑制物，或者是你的pcr扩增效率低。Ct值的范围为15-35。Ct值小于15，认为扩增在基线期范围内，未达到荧光阈值。理想情况下，Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系，也就是标准曲线。通过标准曲线，扩增效率为100%时，计算出基因单个拷贝数定量的Ct值在35左右，若大于35，理论上模板起始拷贝数小于1，可认为无意义。
5 回答
958 围观
问
qpcr和RT PCR在定量定性上面有什么区别？
Eason老歌迷
RT-PCR是PCR的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为cDNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物，使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。实时PCR属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。他俩相结合，能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗
7 回答
5166 围观
问
请问qPCR引物合成出来大概多久内要用完？怎么样验证一下我放了很久的qPCR引物是否还可以用？
天一湖医者
如果放入-20度的话，可以一年。
5 回答
825 围观
问
qPCR产物跑胶电泳条带弥散，条带大小为一百多bp，尝试更换qPCR的条件以及电泳条件，结果依然如故，不知道什么原因
琴妞313
可能是引物浓度不对，建议重新定引物
6 回答
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