常用细胞染色实验

1、离心收集悬浮细胞，微量离心机转速2000RPM，离心时间5min，弃培养基2、用冷PBS洗涤细胞两次3、用400ul 1X Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1 X 10 cells/ml4、在细胞悬浮液中加入 5ul Annexin V-FITC，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育 15 分钟5、加入10ul PI 后轻轻混匀于 2-8°C 避光条件下孵育 5 分钟； 在 1

首先可将成品 JC-1 以 DMSO 配成储存液 (1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至 10ug/ml 终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。

此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解离脱氧核糖核酸，使嘌呤碱基与糖苷犍破坏，嘌呤碱脱掉，脱氧核糖的中的醛基游离；醛基能与Schiff试剂相结合，形成一种紫色的复合物。 本方法中酸的离解根重要，若温度过低、或酸度不够，醛基暴露不充分，染色会过浅；反之，酸解过分，能导致DNA完全解聚，而染色体的染色反应减弱

1. 37 ℃温BSS漂洗3 次，每次20 秒~1 分钟；中性福尔马林固定30 分钟； 2. 先用蒸馏水漂洗1 次；再用蒸馏水稀释的苏木精液（1/20）染10 分钟； 3. 自来水洗、置入1 %NaHCO3液中漂洗至蓝紫色； 4. 伊红水溶液中染30 秒~1 分钟； 5. 蒸馏水洗，迅速通过丙酮2 次，每次3~5 分钟； 6. 通过2：1 丙酮/二甲苯3 次

高尔基染色包括银 Golgi 染色和汞 Golgi 染色技术。银 Golgi 染色原理：浸泡脑组织的重铬酸钾溶液与硝酸银溶液发生反应，生成黑色的铬酸银沉淀，由于组织的嗜银性而沉积于神经细胞中。银高尔基技术主要有两种被广泛应用：快速 Golgi 法和 Golgi- Kopsch 法。汞 Golgi 染色原理：由于银 Golgi 染色存在一定缺陷，Cox 对高尔基技术进行改进，被称为 「Golgi-C

Masson 染色是结缔组织染色中最经典的一种方法,又称马松染色，是显示组织中纤维的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关，分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此 Masson 染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要

免疫细胞化学与免疫细胞荧光两者实现的实验目的相似，但各有优缺点方法比较方法优点缺点免疫细胞化学样品可长期保存一次只能标记一种蛋白免疫细胞荧光步骤较简单，可同时标记不同蛋白，图片观赏性强样品保存时间较短

HE 染色（Hematoxylin-Eosin staining）即苏木精-伊红染色，是病理组织切片最常用的染色技术。主要使用苏木精和伊红这两种染液，其中苏木精碱性染液为蓝色，可以将组织的酸性结构染成蓝紫色（细胞核呈现蓝色；软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝；粘液呈灰蓝）；伊红是一种化学合成的酸性染料，在水中解离成带负电荷的阴离子，易于蛋白质氨基中的正电荷结合使细胞浆染色。细胞浆、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒

TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物。它是呼吸链中吡啶-核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。

衰老细胞有高活性的 β-半乳糖苷酶（β-galactosidase），通过原位染色，以 X-Gal 为底物，在β-半乳糖苷酶的催化下会生成深蓝色产物，通过光学显微镜即可观察。