合作专家 | 黄玥琳博士
生理学 大连医科大学
原理
TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物。它是呼吸链中吡啶-核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。
用途
通过 TTC 染色观察梗死病变及梗死体积。
材料与仪器
2，3，5-三苯基氯化四氮唑溶液；冠状切片脑槽；刀片；戊巴比妥钠；注射器；取脑手术器械。
步骤
1. 麻醉小鼠，断颈取出大脑，将脑放入脑槽中。放入 -80 ℃ 冰箱 1~2 min 或 -20 ℃ 冰箱 20 min，将大脑稍冻硬一点以便于切片。
2. 将大脑冠状切片为四个 2 mm 切片，注意不要损坏脑片完整性。第一刀在脑前级与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾级之间。
3. 将脑片放入 2% TTC 溶液（PBS 溶解）中，避光放入 37 ℃ 恒温箱 15 min~30 min，中途翻动脑片使得染色均匀。
4. 拍照观察，或将染色完毕的脑片放入 4% 福尔马林溶液，固定保存用于后续定量拍照检测梗死区域。
注意事项
1. TTC 染色应全程避光。
2. 动物取材不需要灌流取材，直接取出大脑即可。脑组织较软，取材时要注意保证大脑的完整性。
3. 在做脑槽切片时，提前将脑子冻一下更好切，不易损坏。
4. 染色过深或过浅可能和染色时间有关，可适当调整。
常见问题
1. 切脑片的时候大脑容易损坏怎么办？
答：脑槽中要保证无水，大脑取出要迅速放进脑槽，并快速放入 -80 ℃ 冰箱 1~2 min 或 -20 ℃ 冰箱 20 min，在取出脑片的时候，要两个刀片一起抬出较容易将脑片从脑槽中取出。
2.TTC 染色怎么没有白色梗死区域？
答：考虑造模是否成功，是否 37 ℃ 染色 15 min，并且整个染色过程一定要避光。
来源：丁香实验
