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        Feulgen染色法

        相关实验:培养细胞的染色实验

        最新修订时间:

        原理

        此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解离脱氧核糖核酸,使嘌呤碱基与糖苷犍破坏,嘌呤碱脱掉,脱氧核糖的中的醛基游离;醛基能与Schiff试剂相结合,形成一种紫色的复合物。

        本方法中酸的离解根重要,若温度过低、或酸度不够,醛基暴露不充分,染色会过浅;反之,酸解过分,能导致DNA完全解聚,而染色体的染色反应减弱。细胞中RNA对酸比较稳定,醛基难游离,不被着色,为DNA特异性染色的原因。

        材料与仪器

        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  单层盖片法培养细胞,Carnoy或醋酸/甲醇固定20 分钟;

        2.  投入1 N HCl 1~2 分钟(室温);

        3.  投入1 N HCl 8~10 分钟(60 ℃);

        4.  投入Schiff剂中染色1~5 小时(10 ℃暗处);

        5.  漂洗液洗2 次,每次2 分钟;

        6.  蒸馏水漂洗2 次,每次3 分钟;

        7.  脱水

        75 %→100 %酒精;

        8.  透明

        二甲苯2 次,每次3 分钟;

        9.  封片

        把盖片置于载物片上(细胞面向上),滴树胶少许,再加较大盖片覆盖;

        10.  盖片上加微型重物加压,置数日,树胶干后观察。

        镜下观察可见,细胞核染成粉红色至紫红色,胞质无色(为观察DNA,胞质可不必复染)。

        来源:丁香实验

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