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问
MS到底能不能实现ip后pg级别的蛋白组学分析？
丁香实验
pg级别鉴定是问题不大。问题有几点。主要判定依据是你ip下来的内源性蛋白在整个样品中有没有可能超过鉴定的下限。理论上10万细胞不算少，实际也是对应蛋白质组学而言。但是考虑到你ip的条件，目标蛋白的内源性丰度，非特异结合的蛋白的情况，不能下定论能不能鉴定到。建议尝试。
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658 围观
问
培养液分泌蛋白质谱前处理
青木书生
非标，具体原理你可以去看看我之前的帖子。你这个实验，前期定量在这个实验里面非常重要，毕竟全蛋白如果TIC差距过大，normalization还有个内参蛋白参考。建议送样前跑胶定量。DTT，IAA的母液可以使用10mM-50mM的NH4HCO3溶液，也可以用水配母液。具体工作浓度varies a lot by studios,自查JPR或者MCP文章。IAA注意避光配置，避光孵育，不宜反应时间过长。
2 回答
763 围观
问
【求助】泛素化出不来！
卡戎3521
反过来拉，用ha抗体做诱饵蛋白，fkag显色。。我开始就是转myc/his-Ub质粒跟Flag-A蛋白的质粒，使用Flag做诱饵蛋白，但是每次都搞不出来。。后来看了很多文献，有的就是用Ni直接拉His这种方法，我用类似的His抗体做，成功率就还可以，目的蛋白的上方有多个条带，对照里面就没有~~
2 回答
2468 围观
问
一个质谱结果想请教大家如何分析
黑糊糊2000
这结果应该是PD sequest search result。我们从来不用score。都是PSM vaule. 你的结果是IP 那应该和negative control 比。但是你要注意low psm 不代表这个就是 false positive. 因为这个ＰＳＭ 和蛋白长度也相关所以低PSM 不见的就不好。IP 的结果一般你的bait 会有最高的PSM 有时候也会是heatshock 或者 ri
1 回答
648 围观
问
做Akt的Western blot为什么要做P－Akt和总Akt？
595 围观
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