实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问WB实验，曝光出这种结果，是因为样本浓度过高？还是其他原因？请教一下

yyxhybb

封闭效果不好，适当延长封闭时间看看？

1 回答212 围观

问问下AC16大家用什么培养基呀

木子李二狗

DMEM高糖的，bi的血清挺好的

3 回答436 围观

问贴壁细胞培养，不长的原因？

竹梅九州

检查你的血清和基础培养基，其他人怎么配你就怎么配，要是还不长就是细胞问题了，买新一点细胞来试一下培养基，也不长那就是培养基或者血清问题，按比例梯度摸索血清浓度。

3 回答346 围观

问请问p62和LC3一起减少是怎么回事，看别人的回答说用CQ检验，结果应该是怎么样的

伙子喜欢吃狗腿

请问为啥要用CQ检验，CQ只能检验溶酶体的数量和活性，无法检测自噬溶酶体的形成啊？

1 回答250 围观

问T4连接长了很多菌，但菌P不出来，只有引物二聚体

珠海舒桐

可能是转化效率比较低，可以多p几个菌。要是还没有，建议调整载体和插入片段的比例，重新连接转化

1 回答268 围观

问常规pcr产物电泳结果问题

珠海舒桐

试试换新的缓冲液，电压也要稳定的

1 回答351 围观

问之前做PCR纯化回收的效果都不太好，请教各位大佬们，PCR纯化回收有什么注意事项或者实验技巧吗？

珠海舒桐

适当增加跑胶的上样量，从而提高pcr产物的浓度

2 回答365 围观

问用试剂盒提取真菌DNA，跑胶后结果如图，上样量为5uLDNA和2uLllading buffer，请问大家会是什么原因，谢谢。

dxy_5ha0wjc4

你用的前处理方法是什么啊，我用超声然后出来的条带是弥散的，但条带大小比你大，你这个可能是RNA，DNA没搞出来

1 回答319 围观

问常用的细胞固定液有哪些？

汤姆卜丽波

1.95%乙醇是最常用的细胞学快速固定液。此固定液适用于HE染色和巴氏染色，在细胞细节表现上略差于甲醇。2.甲醇固定时间快，细胞收缩小，细胞核保存较好，结构清晰，染色鲜艳，常作为液基细胞特别是穿刺细胞涂片的固定液。3.冰乙酸醇固定液能沉淀核蛋白，渗透性强，固定快，常与其他溶液混合使用。4.无水乙醇对糖原保存较好，容易使细胞收缩，很少单独使用，一般只用于需要做糖原染色的涂片的固定。5.Carnoy液

40 回答11100 围观

问【铁载体】CSA检测液与发酵上清液混合后沉淀是什么原因？

圆圆的原

我也是有沉淀，但是对照不加菌液就没有沉淀呀

6 回答1842 围观

问细菌与细胞共培养难题

coconut27

请问楼主解决了吗？求一个protocol

4 回答3846 围观

问脾脏原代培养细胞中提取RNA

loveliufudan

有以下几个可能的解释： 1. 细胞数量限制：提取的脾脏细胞数量可能较少，导致RNA的总量有限。如果您使用的是较小的细胞数（每个小鼠脾脏细胞数目较低），则相应的RNA浓度也会较低。 2. 细胞破碎和核酸蛋白复合物分离：在裂解液处理过程中，可能未能充分破碎细胞或完全分离核酸蛋白复合物，这可能导致RNA的部分损失或降解，从而降低提取的RNA浓度。 3. 沉淀和洗涤步骤问题：添加异丙醇和75%乙醇是为了沉

4 回答1558 围观

问求助TAP-缺陷的T2细胞系

土井挞克树

我们实验室有TAP缺陷的细胞系，可以提供

5 回答432 围观

问慢病毒感染THP1怎么做？

梦见好多鱼

你好，请问你后来解决这个问题了吗？我最近在做THP1的慢病毒感染，一加病毒细胞就贴壁了。试了好几次都这样，求救。

3 回答2360 围观

问ELISA 实验求助|阴性血清和阳性血清OD值差距不大怎么办

土井挞克树

你的单抗特异性没那么好，也有可能是你包被抗体的活性不行；建议提高包被浓度试一试，或者提高单抗浓度。

3 回答769 围观

问C28/I2正常人软骨细胞系是不是对炎症刺激不敏感呀，试过各个浓度的IL1β和LPS都不能明显引起细胞的炎症反应

dxy_scykwn3r

您好，想问一下你们购买的C28/I2细胞是从哪儿购买的？

6 回答1408 围观

问求助，人精子蛋白的wb

dxy_wye9d2p

请问你使用的是什么内参，我用β-tubulin当内参一直跑不出来。

4 回答462 围观

问B16细胞培养哪种状态会分泌黑色素

bamboopiggy

B16是黑色素瘤细胞，养48h不换液培养基就会变为黑色，但是我感觉你这个是污染了

5 回答4123 围观

问细胞冻存后如何有效复苏？

茜茜RQ1M

1.细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。2.培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱37°C预热20min，备用。

9 回答1600 围观

问求问wb稀释一抗，一般用什么稀释好呢

dxy_a3w222q8

哈哈哈可能我比较穷，我都是用5%的脱脂奶粉做稀释液（5g奶粉+100ml 1X的TBST漂洗液，摇匀，4℃保存，现配现用）来稀释一抗的，用什么封闭就用什么稀释。

12 回答23051 围观

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