T细胞WB蛋白浓度过低

您好，请问您解决这个问题了吗，我遇到一模一样的问题了

一般做western blotting时，都需要对样品进行定量，至少对蛋白的浓度大致有一个估计值（比如只需要定性分析的时候）。之后不同处理组采用相同的上样量，一般20 ug左右即可，一些丰度的确比较低的蛋白可能需要40~80 ug左右上样量。

考虑是裂解程度不够，建议延长裂解时间

下面是可能导致这种情况的几个原因：

1. 细胞数太少：你提到使用了1.5x10^6个T细胞进行蛋白提取。如果这个数量相对较少，可能会导致提取的蛋白量较低，从而导致浓度低。你可以尝试使用更多的细胞来提取蛋白，以增加蛋白的浓度。

2. 细胞裂解液体积不足：你提到使用了100 μl含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液来裂解细胞。如果细胞数较多，可能需要增加裂解液的体积，以确保细胞得到充分的裂解和蛋白的释放。

3. 蛋白酶抑制剂效果不佳：尽管你使用了蛋白酶抑制剂，但有时仍可能发生蛋白降解。可能需要确认所使用的蛋白酶抑制剂的浓度和效力是否足够，或者尝试其他更强效的蛋白酶抑制剂。

4. 其他实验条件的优化：除了上述因素外，还有其他可能影响蛋白提取的因素，如裂解液的pH、离心速度和时间、裂解温度等。适当地优化这些实验条件可能有助于提高蛋白提取的效果。

一般来说，细胞数量和裂解液体积是蛋白提取中重要的考虑因素。具体的标准可能因实验目的、细胞类型和细胞状态而有所不同。

最后，定量蛋白浓度的方法也可能会影响结果。除了BCA定量，还可以考虑使用其他常见的方法，如Bradford法或Lowry法等，以验证蛋白浓度的结果。