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实验问答

23,972,078 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问怎么测水中的总氮总磷最恰当的方法是什么

loveliufudan

测定水样中总氮和总磷的常用方法主要有:1. 紫外分光光度法:原理是测定水样经过酸化、高温消解后产生的铵盐、硝酸盐以及磷酸盐的紫外吸收值,根据标准曲线计算氮、磷含量。该方法操作简便,可同时测定氮、磷,但检出限较高。2. 连续流动分析法:根据水样经还原、比色等反应后的颜色变化,利用流动注射分析仪连续监测和计算氮、磷含量。该方法精度好,灵敏度高,但仪器要求较高。3. 离子色谱法:根据水样中氮、磷不同形态

3 回答3216 围观

问检测某种抗原特异性T细胞用什么方法比较好啊？酶联免疫斑点试验还是MHC四聚体技术还是细胞内胞内细胞因子染色法啊

loveliufudan

对于检测抗原特异性T细胞,常用的主要方法有:1. 酶联免疫斑点试验(ELISPOT):通过分泌细胞因子形成的斑点数量,反映抗原特异性T细胞的数量。操作简便,灵敏度高,定量结果好。适合检测少量样本。但无法分析细胞亚群。2. MHC四聚体/二聚体技术:通过特异性MHC-多肽复合物识别抗原特异性T细胞。可以结合其他抗体明确细胞亚群。但需要知道特异性肽序列,操作较复杂。3. 细胞因子染色:活化后检测细胞内

3 回答705 围观

问请问如果在基层患者心电图提示ST-T段改变伴心悸这种情况，需要立即上送吗

此用户已注销

出现ST段改变，处理措施具体如下：1、如有明显的变化是严重的；2、如果病人有一定的临床症状，比如胸闷、心慌，而且胸闷时伴有头晕等症状的情况下，结合ST-T改变；如果发病时有明显的ST段下移提示有严重的血管狭窄，持续时间越长，病人症状下移的程度越深，伴随有病人的症状持续，说明有严重的冠脉狭窄，需要进一步就诊，住院做冠脉造影检查，必要时做支架治疗；3、部分病人ST段抬高，比如病人发病时有明显的T波高尖

4 回答849 围观

问Hela细胞为什么转染不进去啊？

loveliufudan

HeLa细胞转染不成功的原因可能有以下几点:1. Lipo2000与DNA的比例可能不适合HeLa细胞,可以试试调整这比例,增加Lipo2000量。2. 汇合时间可能需要延长到10-15分钟,以提高Liposome包裹DNA的效率。3. HeLa细胞状态可能不佳,需要用对数生长期的健康细胞。提前24小时换新培养基可以改善细胞状态。4. 转染液加入细胞中的方式可以优化,滴加转染复合物要轻缓,平铺于整

3 回答833 围观

问蛋白组学数据中，缺失值怎么补全？

此用户已注销

在处理这个问题上出现了一些填充缺失值比较准确地方法，如K个最近邻的缺失值填充法（KNN）、有序的K个最近邻填充法（SKNN）和奇异值分解法（SVD）。

3 回答1588 围观

问细胞免疫荧光去培养基开始用PBS洗时，没有undefined5min，就单纯冲洗三次会不会有影响

此用户已注销

如果没有三到五分钟单纯冲洗还是有影响的

7 回答742 围观

问Elisa实验每次都需要做标准曲线吗

feixue7758527w

是的，Elisa实验每次都需要做标准曲线的，最好做三个复孔的。

5 回答3130 围观

问蛋白质分离纯化的基本原则？

loveliufudan

蛋白质分离纯化的基本原则主要包括:1. 保持蛋白的生物活性:选择温和的缓冲系统,控制温度,加入稳定剂等,以保持蛋白的天然结构和活性。2. 渐进法纯化:通常需要多步骤分离,每一步移除一部分杂质,逐步提高目标蛋白纯度。3. 充分利用蛋白质的化学与物理性质差异进行分离:如大小、电荷、亲和特性等。4. 保持蛋白质溶解状态:控制pH、离子强度、去离子水溶液成分等关键因素。5. 避免蛋白质降解:加入抑制蛋白酶

4 回答1054 围观

问IP类样品的鉴定，若质谱未鉴定到目标蛋白，是什么原因？该如何解决?

balalaLy

可能是蛋白丰度太低或者是ip没有做好，没有拉到目的蛋白。

3 回答827 围观

问小白真诚提问，由于实验室无超速离心机，想提取多聚核糖体，除了蔗糖离心法，还有其他方法吗？

loveliufudan

除了蔗糖密度梯度离心法外,我建议您可以试试以下几种方法:1. 不同浓度NaCl提取:利用不同浓度NaCl溶液裂解细胞,低浓度NaCl可以提取溶酶体,高浓度NaCl溶液可以获得粗提多聚核糖体。2. 离子交换层析:利用DEAE-Sepharose等离子交换基质,依据多聚核糖体和杂质的不同电荷特性进行分离,不依赖离心力。3. Mg2+沉淀:利用Mg2+可以特异聚集多聚核糖体的原理,在适宜浓度Mg2+条件

4 回答1227 围观

问如何来判定哪些蛋白是和自己研究相关的蛋白,挑选什么样的蛋白来进行后期的验证实验?

feixue7758527w

3 回答230 围观

问蛋白组学可以应用于哪些问题的研究?

土井挞克树

可以应用于肿瘤靶向药物相关的研究，是目前比较火的研究方向

3 回答467 围观

问关于“样品重复”，技术重复和上机重复有什么区别？做蛋白组学的话，发表的文章一般要求几次重复呢？

feixue7758527w

蛋白组学实验跟平时实验一样，三次重复就可以了。技术重复就是重新实验的，上机重复就是已有的样本再次在实验机器中再次验证的。

4 回答1964 围观

问请问影响蛋⽩质谱鉴定成功与否有哪些因素?

loveliufudan

影响蛋白质谱鉴定成功与否的主要因素包括:1. 样本准备:样本的提取、处理、解蛋白是否标准化,杂质是否充分去除,会影响后续鉴定效果。2. 色谱分离:是否获得良好的色谱图,峰形是否对称分离清晰,分辨率是否足够。这决定了质谱的质量。 3. 质谱采集参数:扫描范围,碎裂能量,采集时间等参数设置是否优化,直接影响获得的质谱图质量。4. 数据库搜索:选择合适的数据库,设置正确的搜素参数,会影响结果的可靠性。

3 回答513 围观

问iTRAQ/TMT和Label-free技术都有哪些优缺点？

loveliufudan

iTRAQ/TMT和Label-free都是蛋白质组学研究中常用的定量技术,它们各有优缺点:iTRAQ/TMT的优点:1. 可以在同一实验中标记和定量多个样本,提高实验效率。2. 标记后样本混合检测,有利于减少技术误差。3. 标记反应简便,易于操作。4. 标记覆盖面广,可以定量绝大部分肽段。iTRAQ/TMT的缺点:1. 需要额外的标记实验步骤,增加实验复杂度。2. 标记试剂价格较高,会增加实验成

3 回答1613 围观

问如何利用蛋白组学筛选差异蛋白?

生化检验分析

蛋白质组学筛选差异蛋白就是差异蛋白组学研究的主要内容，差异蛋白组学就是在组学水平上研究不同状态或不同处理条件下表达水平存在显著差异的蛋白质，以研究生物体在不同条件下的反应机制，是研究和认识生命活动本质的一个有效途径。差异蛋白质组学在一定程度上揭示了生命活动变化的分子机理，在疾病的诊断、发生、病程和疗效监测上有着重要意义，也广泛应用于作物育种工程和基因工程产物鉴定等。液相色谱串联质谱技术是差异蛋白质

3 回答885 围观

问愈创木酚和过氧化氢需要多大浓度的溶液，各自要用什么溶质去稀释？

feixue7758527w

这两个都是可以用蒸馏水稀释的，具体稀释倍数要看具体实验，我实验时很多时候都不稀释的。

4 回答1171 围观

问Hepg2可以作为可以作为体外研究的人正常肝细胞使用吗？利用lps 诱导构建炎症模型使用？

loveliufudan

关于HepG2细胞在肝病模型研究中的应用,有以下观点:1. HepG2细胞是目前常用的人肝癌细胞系,能表达多种肝脏特异性基因和功能蛋白,可作为体外人肝细胞模型进行相关研究。2. 但需注意,HepG2毕竟是肝癌细胞,与正常人肝细胞有一定差异。使用HepG2建立的模型可能无法完全反映正常人肝细胞的生理功能和病理状态。3. 利用iPSC技术诱导分化得到的肝细胞可能更接近正常人肝细胞,可以作为理想的体外肝

5 回答1023 围观

问在酶的定点突变研究中，某一特异的突变作用是导致酶活性消失，表明该突变残疾具有催化作用，为什么？

loveliufudan

在酶的定点突变研究中,如果某一特异的突变导致酶活性消失,则说明该突变残基很可能参与了酶的催化作用,原因如下:1. 酶催化反应的关键是酶活性中心。活性中心由催化作用的关键氨基酸残基组成。2. 如果突变导致这些关键氨基酸残基被改变,那么会直接破坏酶的空间结构,使催化作用部位无法正确形成。3. 从而使酶无法发挥催化作用,反应不能进行,所以酶活性会消失。4. 因此可以判断,该突变残基 participat

6 回答953 围观

问顺铂可以直接用于体外细胞的造模吗

医路顺风加油

顺铂作为化疗药物，可以直接用于体外细胞实验中。但需要注意以下几点：1.溶解和稳定性顺铂在水中稳定，不需激活。不稳定的报道主要是在某些有机溶剂如 DMSO 中的不稳定。体外实验可以用无菌 PBS 或水溶解。2.浓度范围细胞实验常用浓度范围5-50μ M ，最优浓度因细胞类型不同而异，需要进行预实验确定。太高浓度会导致细胞大量死亡。3．作用时间预处理细胞24-48小时常可见明显作用。需测试不同时间梯度

7 回答2323 围观

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