实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问检测某种抗原特异性T细胞用什么方法比较好啊？酶联免疫斑点试验还是MHC四聚体技术还是细胞内胞内细胞因子染色法啊

loveliufudan

对于检测抗原特异性T细胞,常用的主要方法有:1. 酶联免疫斑点试验(ELISPOT):通过分泌细胞因子形成的斑点数量,反映抗原特异性T细胞的数量。操作简便,灵敏度高,定量结果好。适合检测少量样本。但无法分析细胞亚群。2. MHC四聚体/二聚体技术:通过特异性MHC-多肽复合物识别抗原特异性T细胞。可以结合其他抗体明确细胞亚群。但需要知道特异性肽序列,操作较复杂。3. 细胞因子染色:活化后检测细胞内

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问请问如果在基层患者心电图提示ST-T段改变伴心悸这种情况，需要立即上送吗

此用户已注销

出现ST段改变，处理措施具体如下：1、如有明显的变化是严重的；2、如果病人有一定的临床症状，比如胸闷、心慌，而且胸闷时伴有头晕等症状的情况下，结合ST-T改变；如果发病时有明显的ST段下移提示有严重的血管狭窄，持续时间越长，病人症状下移的程度越深，伴随有病人的症状持续，说明有严重的冠脉狭窄，需要进一步就诊，住院做冠脉造影检查，必要时做支架治疗；3、部分病人ST段抬高，比如病人发病时有明显的T波高尖

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问Elisa实验每次都需要做标准曲线吗

feixue7758527w

是的，Elisa实验每次都需要做标准曲线的，最好做三个复孔的。

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问IP类样品的鉴定，若质谱未鉴定到目标蛋白，是什么原因？该如何解决?

balalaLy

可能是蛋白丰度太低或者是ip没有做好，没有拉到目的蛋白。

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问如何来判定哪些蛋白是和自己研究相关的蛋白,挑选什么样的蛋白来进行后期的验证实验?

feixue7758527w

3 回答205 围观

问蛋白组学可以应用于哪些问题的研究?

土井挞克树

可以应用于肿瘤靶向药物相关的研究，是目前比较火的研究方向

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问关于“样品重复”，技术重复和上机重复有什么区别？做蛋白组学的话，发表的文章一般要求几次重复呢？

feixue7758527w

蛋白组学实验跟平时实验一样，三次重复就可以了。技术重复就是重新实验的，上机重复就是已有的样本再次在实验机器中再次验证的。

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问请问影响蛋⽩质谱鉴定成功与否有哪些因素?

loveliufudan

影响蛋白质谱鉴定成功与否的主要因素包括:1. 样本准备:样本的提取、处理、解蛋白是否标准化,杂质是否充分去除,会影响后续鉴定效果。2. 色谱分离:是否获得良好的色谱图,峰形是否对称分离清晰,分辨率是否足够。这决定了质谱的质量。 3. 质谱采集参数:扫描范围,碎裂能量,采集时间等参数设置是否优化,直接影响获得的质谱图质量。4. 数据库搜索:选择合适的数据库,设置正确的搜素参数,会影响结果的可靠性。

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问如何利用蛋白组学筛选差异蛋白?

生化检验分析

蛋白质组学筛选差异蛋白就是差异蛋白组学研究的主要内容，差异蛋白组学就是在组学水平上研究不同状态或不同处理条件下表达水平存在显著差异的蛋白质，以研究生物体在不同条件下的反应机制，是研究和认识生命活动本质的一个有效途径。差异蛋白质组学在一定程度上揭示了生命活动变化的分子机理，在疾病的诊断、发生、病程和疗效监测上有着重要意义，也广泛应用于作物育种工程和基因工程产物鉴定等。液相色谱串联质谱技术是差异蛋白质

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问愈创木酚和过氧化氢需要多大浓度的溶液，各自要用什么溶质去稀释？

feixue7758527w

这两个都是可以用蒸馏水稀释的，具体稀释倍数要看具体实验，我实验时很多时候都不稀释的。

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问Hepg2可以作为可以作为体外研究的人正常肝细胞使用吗？利用lps 诱导构建炎症模型使用？

loveliufudan

关于HepG2细胞在肝病模型研究中的应用,有以下观点:1. HepG2细胞是目前常用的人肝癌细胞系,能表达多种肝脏特异性基因和功能蛋白,可作为体外人肝细胞模型进行相关研究。2. 但需注意,HepG2毕竟是肝癌细胞,与正常人肝细胞有一定差异。使用HepG2建立的模型可能无法完全反映正常人肝细胞的生理功能和病理状态。3. 利用iPSC技术诱导分化得到的肝细胞可能更接近正常人肝细胞,可以作为理想的体外肝

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问为什么Val走的更远，疏水性不是Leu更强吗?

loveliufudan

的确,从理论上来说,亮氨酸(Leu)的疏水性应该比缬氨酸(Val)更强,因为Leu具有更长的烃基侧链。但是实际上,在标准的层析条件下,Val往往会比Leu迁移更远。这主要有以下两个原因:1. Val的分子量(117Da)比Leu(131Da)小,小分子量使其更容易在层析系统中迁移。2. Leu的烃基侧链是支链,空间构象较Val更复杂。在层析纸上,Leu的迁移可能会受到更大的阻力。所以在此题层析结果

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问在酶的定点突变研究中，某一特异的突变作用是导致酶活性消失，表明该突变残疾具有催化作用，为什么？

loveliufudan

在酶的定点突变研究中,如果某一特异的突变导致酶活性消失,则说明该突变残基很可能参与了酶的催化作用,原因如下:1. 酶催化反应的关键是酶活性中心。活性中心由催化作用的关键氨基酸残基组成。2. 如果突变导致这些关键氨基酸残基被改变,那么会直接破坏酶的空间结构,使催化作用部位无法正确形成。3. 从而使酶无法发挥催化作用,反应不能进行,所以酶活性会消失。4. 因此可以判断,该突变残基 participat

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问最近纯化了一个病毒的3个不同蛋白A,B,C，分别去免疫小鼠，elisa检测血清时发现，包被A蛋白后和A，B，C血清都能反应

晓雨知春来

有很大的可能是纯化的时候污染了。

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问顺铂可以直接用于体外细胞的造模吗

医路顺风加油

顺铂作为化疗药物，可以直接用于体外细胞实验中。但需要注意以下几点：1.溶解和稳定性顺铂在水中稳定，不需激活。不稳定的报道主要是在某些有机溶剂如 DMSO 中的不稳定。体外实验可以用无菌 PBS 或水溶解。2.浓度范围细胞实验常用浓度范围5-50μ M ，最优浓度因细胞类型不同而异，需要进行预实验确定。太高浓度会导致细胞大量死亡。3．作用时间预处理细胞24-48小时常可见明显作用。需测试不同时间梯度

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问求问大佬，miRwalk数据库预测miRNA和靶基因结果怎么样，可靠性大吗？

晓雨知春来

miRwak数据库对miRNA靶基因的预测有一定参考价值,但预测结果的可靠性尚有限生物验证是最终确认mRNA靶基因关系最重要的手段。miRwalk的预测结果只能作为miRNA靶基因研究的起点需要进一步设计实验进行验证方可得出更加准确和令人信服的结论。

3 回答821 围观

问求，分子量在91kd的电泳和转膜条件!

dxy_w0bqu5c9

建议分别用两个海绵夹转，然后跑的时候可以分别配两种不用的胶，1%的胶和1.5%的胶，91KD的话，可以用120V电泳100分钟左右，250mA转膜转2个小时左右

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问网状meta

晓雨知春来

回归分析可以考虑采用元回归方法.以研究水平特征为自变量.研究间影响大小(如logRR)为应变量建立模型

3 回答417 围观

问关于R语言的亚组分析

loveliufudan

在R语言中，您可以使用coxph函数来进行Cox回归分析，并使用参数进行分组对比和分层调整。以下是一些示例代码，可以帮助您进行这样的分析：首先，您需要加载适当的R包，如survival和forestplot：```Rlibrary(survival)library(forestplot)```接下来，您可以创建一个Surv对象来定义生存时间和事件状态：```R# 假设您的数据框名为data，并包含

2 回答899 围观

问Meta分析文献质量评估方法QUADAS 2

汤姆卜丽波

你这种情况既没有明确的连续性也没有时间界限，保险来看应该选择否

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