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问
为什么用 ELISA 试剂盒检测样品显色无差异?
jm晶美生物
显色弱灵敏度低。在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后,酶标板中孔的显色比较浅,即只有微弱的信号呈现。 出现该现象的可能原因: 1.产品过有效期,试剂没有按规定进行适当的保存。 2.试剂,标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。3. 少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。4. 洗板或者加样过程中,酶标物受污染失活。5.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。6.洗涤液稀释倍数不符合要求,洗板次数过
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问
培养箱出问题,细胞还能用吗?
达达力呀
你是做什么检测的?我们之前遇到过断电的情况,我们是做细胞核型分析的,结果还好。
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问
WB 条带上出现类似气泡的东西该如何改善?
tao0129
配胶用玻璃板和边条应及时洗净。玻板未洗净的坏处很多:1. 尽管玻璃看似平滑,但是一些细微的凹陷处会凝结肉眼无法分辨的胶颗粒(摸上去疙疙瘩瘩),其坏处是,在该部位极易导致不均匀的胶块,样品经过该处或电泳散热不好,条带变形。2. 如果是RNA的超薄胶,胶板的颗粒会导致局部巨大气泡,非常难于清除;蛋白胶也会导致一些小气泡的产生。3. 玻板没洗净的另一个坏处是,由中学物理知识可知,玻璃表面越光滑粘附越牢,
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问
我的WB条带出现在它不应该出现的地方怎么办?
赵栋2012
qingshi战友回答:我想你可以从几下方面考虑:1. 从组织中提取的蛋白春不纯,用什么方法抽提,抽提完了后,PAGE的结果怎么样?2. 如果PAGE结果明显,而WESTERN无信号,你应该考虑两点:60KD左右的物质可能是什么,抽提过程中自带的,还是il-6形成DIMER?第二复核你用的抗体3. 一定要跑变性不连续电泳,CHECK你用的LOADING BUFFER。4. 换用标准品的IL-6,作
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问
怎么样用免疫磁珠法分离小鼠骨髓巨核细胞呢?有特定的试剂盒吗?
极客医生
CD41抗体 配免疫磁珠 加MACS Large Cell column,貌似没有直接偶联CD41的磁珠,但有有巨核细胞分离液啊。
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问
显微镜目镜和物镜多少倍可以看见血小板?
论文菌
看不到的,confocal 60倍油镜 隐约能看到血小板
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问
WB高背景问题求助
极客医生
如果显色液 确定没问题 考虑下 胶本身的问题 和 封闭液不太好
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问
15kd 湿转半小时会不会转过头?
糖guo
如果害怕转过了,可以尝试放两张膜来转,前后两张都显影,看看结果。
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问
谷胱甘肽标签蛋白包涵体纯化方法?
一乐到底
我也是使用GST标签蛋白,用全式金蛋白纯化方法,试剂盒要求过柱纯化前先变性再复性,在尿素透析复性过程中一直出现沉淀,请问怎么解决
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问
RNA 如何在提取过成中如何避免降解?
论文菌
用过柱法提取RNA比较好
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问
血液样本冻存应该用什么试剂?要先去掉红细胞么?
芳草流年
应该能提出来,我们实验室经常做microRNA提取,试剂盒用过QIAGEN、ROCHE、BIOG,效果都还可以。
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问
前引物和后引物温度Tm相差10℃这对引物还可以用吗
极客医生
当然不用啊 说明GC比例不和谐啊
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问
WB 上样量怎么计算?
论文菌
最大浓度x对应体积再➗最小浓度就是最大浓度对应的体积,然后总体积再减去当前体积,等于需要稀释的体积。
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问
请问 SDS-PAGE 实验中出现拖尾的现象是什么原因?
极客医生
marker很清晰,胶应该是没有问题的。样品有问题,可能是蛋白样品发生降解,在上样之前,要把蛋白样品在100度煮几分钟,变性失活。同时改变一下上样量,一次性不要太多。用新鲜样品,最好现煮现跑。
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问
鼠动脉粥样硬化模型取主动脉做切片怎么操作?
论文菌
我们做取主动脉切片时,出于需观察全面的角度,一般取主动脉弓根部,取动脉环,不取纵切片。对于制作石蜡切片,不用考虑脂肪影响,脂肪在有机溶剂中会溶解,最后在切片上展现为空泡状,不影响实验结果观察。
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问
AB抗体检测出来的条带为什么不在一个位置?
极客医生
因为最后跑的是变性胶 所以最大的可能是B比原来的位置小了 我第一直觉会test是不是降解了 A有助于稳定B 遏制B的降解 所以会跑出B的碎片,顺手验证一下就用同样的样load一个继续跑过 把小分子量的区域拉开 看在小分子量的区域能不找到另一部分B,如果B大了 就先矫正一下系统。
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问
RNA提取的时总出现双峰该怎么办?
极客医生
双峰,不知是哪种样子的双峰(左右?上下?),如果是左右可能浓度太低吧,而且不是很纯,导致230值比较高。如果是上下,emmmm,你是不是选了两个值?2)逆转录以后不用测浓度,很好奇你为什么测浓度。举个例子,你把反应完的PCR产物拿去测浓度,无论你的目的基因有没有扩增出来,NanoDrop测出来的浓度都是一样的,也就是说,测浓度是没用的,同理,反转录以后测浓度也没有用。一般是反转录前算好RNA浓度,
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问
枯草芽孢杆菌接种总是污染,怎么办
极客医生
把不带抗性的LB plate 放在超净台里,打开超净台风扇,30min后取出LB plate过夜培养,次日查看菌落数目,若大于2则说明超净台有问题,是污染源。
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问
传代培养喉癌细胞有哪些注意事项?染菌好多次了,求助
alaling
1.首先做一个培养基的培养,看看无任何条件下是否有菌生长,以此确定是你的环境(包括超净台、培养器皿、培养基等等等等)是否有问题2.如果培养基有菌生长,从培养环境开始找问题,比如培养基是不是被污染,用的器皿是不是被污染,超净台是不是已经不达标(这个是最惨的……)等等3.如果培养基没有菌生长,可以从自己的操作上找找原因,是不是操作规范。
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问
什么情况下转化平板上会出现卫星菌落?
李存耀
氨苄的抗菌效果的时间段在13-16个小时,一般转化后14个小时菌斑就能够满足接下来下面的实验要求了,菌斑直径在0.5mm左右,16小时后还在37℃下培养就会出现卫星菌
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