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问
做免疫沉降能否使用不同公司生产的抗体?
changhao6787
能不能做IP要看抗体说明书,有适用范围;磷酸化和非磷酸化MW差不了这么多,基本是一致的,你可以看看sigma是不是对于截短的蛋白跑wb的,具体你目标蛋白的分子量(MW)你可以在NCBI上或是文献途径确定一下,没有要求鼻血用一种公司的抗体进行试验。
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问
用 -70℃ 冰箱细胞冻存复苏成活率低的原因有哪些?
chinalip
1、细胞冻存于-70-80℃保存半年左右是没有问题的,关键是用于冻存的细胞首先状态要好,然后进行程序性降温,4度1h,-20度2h,后转移到-80度。当然也可以使用程序降温盒(提前拿出来解冻)。2、DMSO的浓度10%左右为最好。3、复苏和冻存的程序怎样才能达到最好效果?复苏和冻存的总的原则是慢冻速溶,复苏时预先打开水浴锅37度,将冻存细胞取出立即溶解,加入培养基后离心五分钟,重悬细胞后置于细胞培
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问
原核表达目的蛋白分子量小于GST标签蛋白是为什么?
detaibio
原核蛋白表达与纯化实验所表达的目的蛋白大多数是以包涵体的形式表现,有些蛋白可以通过降低温度,加快实验速度来改变表达情况,使蛋白表达为可溶性上清蛋白,但是最有效的还是做包涵体复性,这是比较稳妥的,可获得可溶性蛋白的方法,只是活性上会有所降低。
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问
肝细胞 HL-7702 要怎么培养?
amyliu33
如果回输给人类,要用无血清的培养基。肝细胞为多边形,贴壁培养。
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问
求高手指点 WB 曝光为什么出现反影?
lostree5544
最简单的方法就是换下试剂,之前我们也是遇到了麻烦,百思不得其解,老板给的意见,结果就这么出结果了.请问你片子是机器洗出来的,还是手工的呢?
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问
细胞逐步冻存,放置时间稍长有问题吗?
我是金博士
既然要求-20°20min,那你为啥40min呢?这个时间是个经验值,具有普适性,但也不排除个体差异性,看看细胞有没有破坏,就知道这样行不行了,20min只是个大概值,你可以比较一下嘛,就有结果了。
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问
复苏后第二代死亡是为什么?
yyygo
CHO细胞,做稳定转染,为何不加MTX筛选呢?这样不能保证细胞是单克隆啊,如果是细胞瞬时转染表达的话,瞬时快速不需压力筛选
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问
冻存细胞从 -80 转到液氮的运输有没有好的方法?
xxfn
没有,哪有这样,不会是这个影响,细胞培养中的其他问题吧应该是
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问
刚买回来的抗体,如何对它的质量好坏进行评价?
caiyunmm
哦哦,一般都做什么重复验证实验啊。。有文献推荐么。。
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问
原代大鼠神经元培养为什么会染菌?
yyygo
黑胶虫不会使培养基产生明显变化,而且对细胞的生长也不会有大影响,一般细胞生长好的话,黑胶虫会自动被抑制,菌液变浑浊变白是染其他菌了,而且是原代培养,染菌的主要事项要注意很多了 ,可以看一下网上很多文章吧
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问
半贴壁细胞做免疫荧光,该怎么处理呢?
jingle8713
收集细胞,用PBS洗涤,然后加入血清重悬。载玻片要用酒精泡,然后清水浸泡,烤干之后用多聚赖氨酸浸泡,烤干后,将细胞悬液涂在载玻片上面。室温晾干,待片子干了之后就可以继续往下走了,固定,通透等
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问
蛋白可溶性不好怎么办?
detaibio
对原核表达蛋白的活性有较高需求的话,建议先判断表达条件,对表达条件优化,如降低温度,提高IPTG浓度等;最后再采用包涵体复性的方法来重折叠蛋白
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问
慢病毒在成纤维细胞过表达IL-32,看其对细胞增殖凋亡的影响体外,买现成的人成纤维细胞,若不建立稳转的细胞,能说明实验的有效性吗
yyygo
慢病毒在成纤维细胞过表达IL-32,看其对细胞增殖凋亡的影响,不进行稳转细胞系构建,也能说明实验的有效性吧对细胞增殖凋亡的影响短时间的3-4天可否满足如果可以就不必进行了,那个时间太长了要持续半年耗不起
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问
感受态制备不出来是为什么?
detaibio
做大肠杆菌蛋白表达试验中,感受态的制备主要与以下几个因素有关:1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml );2.所有操作均应在无菌条件和冰上进行;3.经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加, 24小时达到最高,之后转化
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问
为什么我的感受态制备不出来?
detaibio
影响大肠杆菌蛋白表达实验中,感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项:1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml );2.所有操作均应在无菌条件和冰上进行;3.经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加, 24小
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问
western blot 背景深哪位大神知道这种水泡样的背景怎么去除
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问
请问微管蛋白试剂盒是怎么使用的啊?谢谢!
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问
请问稳定转染稳定细胞系统构建的过程是什么样的?
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问
关于软骨细胞
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问
使用脂质体瞬时转染,预实验是用空载体还是含有目的基因的载体做呢?还是两者都用
yyygo
脂质体细胞转染用目的载体做,预实验也相当于是摸索条件的了
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