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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
封闭之后需要用 TBST 洗吗?
wd26persist
如果封闭液是5%的牛奶,而一抗稀释液1%de BSA的话,需要用TBST过一下
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问
G418 筛选小鼠支持细胞确定最佳筛选浓度时,浓度都加到 5mg/ml 了,但两周后为何不见细胞死亡?
马帅儿
方便的话,把你设的浓度梯度和细胞show一下;首先查一下文献,大家都用的什么浓度(如果有的话),一般我们用G418筛选浓度为几百ug/ml,不会像你说的那么高的。。。
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问
加样的时候样品老飘出来是为什么?
天野
1.loading buffer的甘油太少,时间放置过长,浓度不对(5×、1×)2.电泳液放置时间过长、浓度太高3、胶没配好或拔梳子用力不均匀,上样孔中有凝胶
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问
为什么会出现自发性荧光?
loyh
所有细胞都会有不同强度的自发荧光,自发性荧光与细胞内的NADH、核黄素等成分所引起的,这些成分可以被蓝光所激发,发射光波谱大约500-700nm范围,与几种常用的荧光染料,如FITC/PE等的发射波谱有一定的交叉!它的波峰为绿光,因此与FITC发射波谱重叠最多。
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问
请问出现散乱不规则分布的原因是什么?
远古的早晨
多孔板可能好一些
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问
组织 RNA 抽提时总是降解,出现一条很糊拖尾的带;但是同时抽提细胞内的 RNA 结果就很好。这是为什么?
Chjiknn
实验前有没有紫外照射超净台,是否有带口罩和帽子,是否彻底隔绝了各种可能产生RNA的途径?
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问
4% 多聚甲醛灌流固定,不是0.1M PBS 配的,冰冻切片,漂染,发现片子易碎为什么?
hh54ll
那个组织的切片,固定时间多长,固定完成后用的什么处理的。问的太笼统了!
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问
测得样品浓度太高怎么办?
我是金博士
说明样品没有稀释到测量范围,稀释后再试试
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问
为什么电泳没有条带,就连 marker 都跑不出来?
我是金博士
如果不是样品的问题,那就是胶的问题。有没有加DNAGreen啊
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问
PCR-RFLP实验中遇到的问题
我是金博士
有没有做过对照实验,就是新买来的内切酶,先验证他能否将该位点切开?
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问
酶切之后就可以直接电泳了吗?
我是金博士
1、酶切时间太长 2、为啥是用上样buffer终止?应该没法终止,估计都切没了 3、纯化产物之前没跑胶吗? 4、跑胶之前要染色的
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问
想问一下大家 PCR扩增时 模板DNA是不是不能反复冻融 那我该怎么用呢
我是金博士
有两个办法:1、分开装,每个管装一小部分;每次用就取一管,这是最好的。2、可以放4度冰箱的,但是注意冻融一两次以后就不要再用了。
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问
耐药株耐药倍数多少才能做相关实验?
janice1223
7-8倍才好做实验呢
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问
PT-PCR 两步法中为什么跑不出来曲线?
sean18
首先,应该是RT-PCR,不是PT-PCR。RT-PCR就4个基本因素模板、引物、PCR试剂及PCR条件。曲线一直都是平的,一点都没有,非常可能的一点是你的realtime PCR仪设置出问题了,滤片模式选择错误。
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问
经酶切后的线性 DNA 可以直接进行转化么?
我是金博士
要酶连过呢,先连接到载体上。不过你可以试试。
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问
补体测定实验中,用到的胎牛血清需要灭活吗?
游刃有余-xiaobao
需要的,补体结合实验需要灭活,最好是活性炭过滤血清
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问
质粒 DNA 比基因组 DNA 更大吗?
hexiabeibei8687
不是吧,细菌基因组怎么也有M级哦,质粒一般也就几K吧
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问
为什么我总是提取不到DNA?
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问
细胞划痕实验加的无血清培养基里含有生长因子吗?
风落无尘
如果你对生长因子的界定是促进或者辅助细胞生长的因子,那么肯定是有的
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问
请问血样品做wb 应该怎么处理?
200910601012
这是不可避免的,因为存在血脂。建议还是做ELISA,如果样本能够脱脂的那就OK拉,或者就是稀释倍数大点。现在有专用的试剂盒,我们实验室说做过,但是我没经手!具体可以查阅相关文献。
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