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问
用 -70℃ 冰箱细胞冻存复苏成活率低的原因有哪些?
chinalip
1、细胞冻存于-70-80℃保存半年左右是没有问题的,关键是用于冻存的细胞首先状态要好,然后进行程序性降温,4度1h,-20度2h,后转移到-80度。当然也可以使用程序降温盒(提前拿出来解冻)。2、DMSO的浓度10%左右为最好。3、复苏和冻存的程序怎样才能达到最好效果?复苏和冻存的总的原则是慢冻速溶,复苏时预先打开水浴锅37度,将冻存细胞取出立即溶解,加入培养基后离心五分钟,重悬细胞后置于细胞培
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问
免疫组化一抗的选择要点和技巧是什么?
xtt123
要点:一抗二抗都是一种可以特异结合别的东西的基团,而且一抗可以至少结合两种其他基团(底物和二抗)
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问
复苏后第二代死亡是为什么?
yyygo
CHO细胞,做稳定转染,为何不加MTX筛选呢?这样不能保证细胞是单克隆啊,如果是细胞瞬时转染表达的话,瞬时快速不需压力筛选
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问
检测膜蛋白与另一蛋白相互作用,膜蛋白不表达?怎么解决?
dxymuchong
可以外转膜蛋白基因,再做co-IP啊,或者也可以做做IF(免疫荧光)看是否有共定位
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问
如果电泳中发现DNA几乎不移动,可能是什么原因?
王国的雪
可能是电泳缓冲液的PH值不对。每次应该用新配置的。或者电泳仪的电流太小了。
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问
酶切反应中添加酶的量应控制在什么范围,为什么?
yhh931229
为了防止出现星号活性,因为甘油浓度上升,酶量上升都有可能会出现星号活性。
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5288 围观
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问
冻存细胞从 -80 转到液氮的运输有没有好的方法?
xxfn
没有,哪有这样,不会是这个影响,细胞培养中的其他问题吧应该是
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问
限制性内切酶进行酶切DNA实验时DNA必须是纯化的吗?
王国的雪
我觉得是必须的,如果DNA不纯,会影响酶切反应。
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问
RIPA 裂解细胞过程中体积逐渐变少怎么办?
zhangshm2005
加完裂解液就用刮刀刮下来吸到EP管里再放置在冰上,不要先放置再刮,不然就容易干
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问
上样蛋白量在多少范围内(ug)比较合适啊?
yudengsu
但如果是膜蛋白的话,上样量的多少,我上了75ug都没出
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问
实验欲获得某一确定的质粒,请问接下来该如何做?
我是金博士
个人觉得实验目的是要获得质粒,那么将产品洗脱之后,还有电泳跑胶,然后切胶之后纯化,再转化到相应菌种里面去。
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问
LiCL wash buffer不溶
vickywanglan
应该是比较高浓度的licl遇到非离子刑去垢剂NP-40之后变浑浊了,我一般配置的时候是每种溶液都配置成母液(比如10% NP-40, 5M LiCL, 500mM EDTA等),然后在将母液稀释成工作液的浓度,配的时候先加入水,然后再加其它成分,一般不会出现有沉淀的情况。
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3053 围观
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问
细菌无氧环境
哈咕哈咕
有产气袋可以买来用,根据你对缺氧程度的需求选购。
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问
QPCR 时,取 DNA 的量应为多少?
dyyapple1985
做chip时,input 留做chromatin【预加抗体】的1/10,做q-PCR时,input 再1:10稀释,然后和抗体沉淀的DNA作对比
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10385 围观
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问
细胞免疫荧光中 Alexa Fluor488 二抗在镜检中曝光时间是多少?
huangyusheng
好像300~800毫秒
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问
植物免疫沉淀酶切的疑问
1698 围观
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问
请问微管蛋白试剂盒是怎么使用的啊?谢谢!
1080 围观
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问
请问稳定转染稳定细胞系统构建的过程是什么样的?
1854 围观
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问
分子生物学
我是金博士
这个你要查一下文献,一般会有破碎条件。然后摸索一下,就可以了。
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问
HO-8910 和术中取材的瘤细胞有什么区别?
云天昊
这个二者是不一样的,从DNA水平,患者身上获得的样本,不一定能稳定传代
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